Sequenciamento de Bisulfitos

Metilação de DNA é um mecanismo epigenético conhecido por desempenhar um papel na regulação gênica de mamíferos, impressão genômica, e supressão de elementos transponíveis. Os padrões de metilação podem ser caracterizados pela interrogação de loci específicos ou através do perfil de metilação de todo o genoma. O tratamento com bissulfito é considerado o método padrão-ouro para determinar a metilação do DNA.
O bissulfito de sódio deamina citosina não modificada para uracil, mas não afeta as 5-metilcitosinas. O DNA tratado com bissulfito é então amplificado pela PCR, durante a qual as 5-metilcitosinas são amplificadas como citosinas e os uracílios são amplificados como timinas . A sequência de ADN pode então ser usada para elucidar o estado de metilação de uma região de interesse ou de todo um genoma com resolução de um único nucleótido.
A amplificação de DNA tratado com bissulfito requer uma enzima capaz de tolerar DNA contendo uracil e alvos altos de AT (a conversão de citosinas não modificadas em timinas aumenta a razão AT do DNA alvo). A EpiMark Taq DNA polimerase da NEB foi otimizada para a amplificação bem sucedida do DNA tratado com bissulfito.