Charakteristika fluoroforu

Charakteristika fluoroforu

JIR nabízí širokou škálu fluorescenčních konjugátů, které pokrývají nejčastěji používané excitační zdroje a sady filtrů od modré až po infračervenou emisi. Následující informace popisují některé vlastnosti rodin fluorescenčních barviv a místa jejich nejlepšího použití. Informace o jednotlivých barvivech naleznete výběrem barviva z níže uvedené tabulky.

Další informace o výběru fluoroforu pro vaši aplikaci naleznete na stránce výběru fluoroforu.

Fluorescenční barviva Alexa Fluor®

Fluorescenční barviva Alexa Fluor® jsou všeobecně uznávána jako vynikající fluorescenční barviva, respektovaná pro svůj jas a fotostabilitu. Jsou dobře rozpustná ve vodě a zůstávají fluorescenční od pH 4 do pH 10.

Přečtěte si více o konjugátech Alexa Fluor®.

IF obraz tkáně sítnice potkana vizualizovaný pomocí sekundárních protilátek konjugovaných s JIR Alexa Fluor®
Tkáň sítnice potkana vizualizovaná pomocí streptavidinu Cy™5 (016-170-084) a Alexa Fluor® 488 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) (115-545-003). Obrázek s laskavým svolením Mansour et al (2008).

Barviva Brilliant Violet™

JIR nabízí dvě barviva BD Brilliant Violet, BV421 a BV480 (tato barviva jsou pojmenována podle svých emisních maxim, zatímco mnoho fluoroforů je pojmenováno podle excitačních maxim). Barviva BV jsou polymerní řetězce a lze je považovat za soubor optických segmentů, z nichž každý má schopnost absorbovat světlo a emitovat fluorescenční signál. Výsledkem jsou barviva, která mají jasný fluorescenční signál pro vynikající rozlišení a citlivost.

Přečtěte si více o konjugátech Brilliant Violet™.

Cyaninová barviva (Cy™2, Cy™3 a Cy™5)

Mezi v současnosti dostupnými fluorescenčními barvivy jsou cyaninová barviva schopna lépe odolávat náročným podmínkám dehydratace a zakládání, které jsou nutné pro montáž řezů do nepolárních plastových montážních médií, jako jsou DPX a Permount™. Kyaninová barviva jsou v nepolárním prostředí jasnější než ve vodných médiích, což vede ke zkrácení doby akvizice ve srovnání s barvivy DyLight™ a Alexa Fluor®, i když jsou tato barviva ve vodných montážních médiích jasnější.

Přečtěte si více o kyaninových konjugátech.

Fluorescenční proteiny – fykoerythrin, PerCP a alophycocyanin

Jackson ImmunoResearch nabízí 3 fluorescenční proteiny: fykoerythrin (R-PE), alophycocyanin (APC) a peridinin-chlorofyl-protein (PerCP). R-PE a APC jsou fykobiliproteiny sbírající světlo, které se nacházejí v červených, modrozelených a kryptomonádových řasách. Společnost Jackson ImmunoResearch nabízí R-PE ve formě, která se nachází v červených makrofytních řasách (mořské řasy). APC je izolován ze sinice Spirulina. PerCP je fluorescenční peridinin-chlorofyl-proteinový komplex izolovaný z dinoflagelátů. R-PE, PerCP a APC mohou být excitovány světlem v širokém rozsahu viditelného spektra, jsou dobře rozpustné ve vodě, mají relativně nízký izoelektrický bod a postrádají potenciálně lepivé sacharidy. Je třeba poznamenat, že relativně vysoká molekulová hmotnost těchto fluorescenčních proteinů může bránit jejich použití v postupech vyžadujících dobrý průnik do buněk a tkání. Jsou určeny převážně pro povrchové značení buněk pro průtokovou cytometrii.

Přečtěte si více o sekundárních protilátkách pro průtokovou cytometrii.

Fluorescenční konjugáty dostupné od společnosti Jackson ImmunoResearch

V současné době je od společnosti Jackson ImmunoResearch k dispozici následujících sedmnáct fluorescenčních sond. Pro více informací klikněte na jednotlivé fluorofory v tabulce.

Fluorofor Excitační pík (nm) Emisní pík (nm)
DyLight™. 405 400 421
Brilantní fialová 421™ 407 421
Aminometylkumarin acetát, AMCA 350 450
Brilantní fialová 480™ 436 478
Cyanin, Cy™2 492 510
Alexa Fluor® 488 493 519
Fluorescein, FITC/DTAF 492 520
Indokarbocyanin, Cy™3 550 570
R-fykoerytrin, R-PE mnoho, 488 580
Rhodaminová červeň™-X, RRX 570 590
Alexa Fluor® 594 591 614
Allophycocyanin, APC mnoho, 650 660
Alexa Fluor® 647 651 667
Indodikarbocyanin, Cy™5 650 670
Peridinin-chlorofyl-protein, PerCP mnoho, 488 675
Alexa Fluor® 680 684 702
Alexa Fluor® 790 792 803

Stáhněte si textové soubory pro všechny konjugáty fluorescenčních barviv pro porovnání excitačních a emisních spekter

Fluorescenční sondy dostupné od společnosti Jackson ImmunoResearch. Máme také konjugáty TRITC a omezené zásoby konjugátů DyLight™ 488 / 549 / 594 / 649 a Texas Red®.

Prohlížeč spekter

Fluorescenční sondy nebo fluorofory (fluorescenční barviva nebo proteiny) jsou spojeny se sekundární protilátkou nebo streptavidinem, aby umožnily vizualizaci analytu. Každý fluorofor má své vlastní spektrální charakteristiky s excitačním a emisním spektrem specifickým pro danou molekulu. Pomocí prohlížeče spekter můžete sestavit panely barviv a porovnat vhodnost barviv pro vaši aplikaci. Předinstalována jsou čtyři barviva obvykle doporučovaná pro vícenásobné značení, která lze podle potřeby měnit.

Přečtěte si náš blog o výběru fluoroforů pomocí prohlížeče spekter.

Nahoru

Leave a Reply