Integrated Microscopy Center

Som en standardmikrotom fungerar en kryostat för att få fram tunna (1-10 mm tjocka) snitt från en vävnad, men medan en standardmikrotom utför operationen vid rumstemperatur gör kryostaten det möjligt för operatören att skära vävnaden vid låg temperatur (-20 till -30 C). I en kryostat är bladet och provet placerade i en upprättstående stationär frys/kammaren medan hjulet för att rotera provhållaren är externt placerat.

Vävnader för sektionering med kryostat behöver inte fixeras i formalin i timmar eller dagar, vilket är fallet vid rutinhistologi. Istället kryofixeras vävnaderna omedelbart efter provtagning. För kryofixering placeras vävnadsbitarna i ett visköst, gelliknande medium (OCT) och doppas i isopentan som kyls med torris eller flytande kväve.

För sektionering placeras de frysta OCT-vävnadsblocken på en metallplatta som för deras temperatur till -20 till -30 C. När denna temperatur är uppnådd monteras provet på mikrotomfästet och sektioneras. När sektioner av tillfredsställande kvalitet har erhållits monteras de på ett glasobjektiv vid rumstemperatur (~20 C). Den högre temperaturen på glasplattan i förhållande till vävnadssektionen gör att sektionen omedelbart smälter och fastnar på glaset.

Helheten från kryofixering till att få fram sektioner på glasobjektsglas kan ta så lite som 10 till 20 minuter, vilket möjliggör snabb analys av proverna.

Användningar

Kryostatsektionering erbjuder två huvudsakliga fördelar jämfört med standard histologisk mikrotomsektionering. För det första är omloppstiden från fixering till vävnadssektion mycket kortare. För det andra bevaras proteinantigeniciteten bättre och därför är kryostatsektioner väl lämpade för immunofluorescensfärgning av flera proteiner i samma vävnadssektion.

Nackdelen med kryostatsektionering jämfört med standard histologisk mikrotomsektionering är att de cytologiska egenskaperna hos hematoxylin-eosin (H&E) färgade paraffinininbäddade vävnadssektioner är överlägsna dem hos H&E färgade kryostatsektioner. Detta beror på att iskristaller kan bildas under kryofixeringsprocessen, vilket förvränger cytoarkitekturen. Dessutom tenderar kryofixerade vävnader som är inbäddade i OCT att frystorka och bör helst sektioneras omedelbart efter kryofixeringen eller förvaras under förhållanden som minimerar frystorkning.

Specifikationer för Shandon FE-kryostaten

• Touch screen display för inställning av sektioneringsparametrar
• Sektionstjockleksjustering 1-20 μm i 1μm justeringar och 20-60 μm i 5μm justeringar
• Vertikal skärslinga 57mm
• Horisontell provförflyttning på 25 mm
• Kryokammarens temperaturreglering 0° till -35°C
• Kryobar och dedikerat justerbart kryobarkylsystem till -55°C. Kryobarens kylsystem kyler prover på så lite som två timmar samtidigt som det förhindrar frysning
• Temperaturkontroll för provhållare 0° till 40°C (±10° av kammarens temperatur)
• Positivt låsande svänghjul för att förhindra skador när man arbetar runt bladet och provet
• Automatisk gasningscykel för att desinficera kammaren
• Användning av CFC-fria köldmedier och skumisolering
• Dubbla kompressorsystem för att säkerställa provets integritet genom att hålla proverna frysta om kryobaren går sönder
• Ergonomisk utformning med ett justerbart fotstöd i tre nivåer för att minska trötthet när man sitter eller står och ett upphöjt skärområde för att förhindra ryggspänningar när man sektionerar