Integrated Microscopy Center

A kriosztát a hagyományos mikrotomhoz hasonlóan arra szolgál, hogy egy szövetdarabból vékony (1-10 mm vastagságú) metszeteket készítsen, de míg a hagyományos mikrotom szobahőmérsékleten végzi a műveletet, a kriosztát lehetővé teszi, hogy a kezelő alacsony hőmérsékleten (-20 és -30 C között) vágja a szövetet. A kriosztátban a penge és a minta egy függőlegesen álló fagyasztóban/kamrában található, míg a mintatartó forgatására szolgáló kerék kívül helyezkedik el.

A kriosztátos metszéshez a szöveteket nem kell órákra vagy napokra formalinban rögzíteni, mint a rutin szövettan esetében. Ehelyett a szöveteket a mintavétel után azonnal kriofixálják. A kriofixáláshoz a szövetdarabokat viszkózus, gélszerű közegbe (OCT) helyezik, és szárazjéggel vagy folyékony nitrogénnel lehűtött izopentánba merítik.

A metszéshez a fagyasztott OCT szövettömböket egy fémlemezre helyezik, amely -20 és -30 C közötti hőmérsékletre hozza őket. Ha ezt a hőmérsékletet elérték, a mintát a mikrotóm tokmányára szerelik és metszik. Miután kielégítő minőségű metszeteket kaptunk, azokat szobahőmérsékleten (~20 C) üveglemezre rögzítjük. Az üveglapnak a szövetszelvényhez viszonyított magasabb hőmérséklete miatt a szelvény azonnal megolvad és az üveghez tapad.

A teljes folyamat a kriofixálástól az üveglemezre helyezett metszetek elkészítéséig mindössze 10-20 percet vehet igénybe, ami gyors mintaelemzést tesz lehetővé.

Alkalmazások

A kriosztátos metszés két fő előnyt kínál a hagyományos szövettani mikrotomos metszéssel szemben. Először is, a fixálástól a szövetszelvényezésig tartó átfutási idő sokkal rövidebb. Másodszor, a fehérjék antigénje jobban megmarad, ezért a kriosztátmetszetek jól alkalmazhatók több fehérje immunfluoreszcens festésére ugyanazon a szövetmetszeten.

A kriosztátmetszés hátránya a standard szövettani mikrotomos metszéssel szemben az, hogy a hematoxilin-eozin (H&E) festett paraffinba ágyazott szövetmetszetek citológiai jellemzői jobbak, mint a H&E festett kriosztátmetszeteké. Ennek oka, hogy a kriofixálás során jégkristályok képződhetnek, amelyek torzítják a citoarchitektúrát. Ezenkívül az OCT-be ágyazott, kriofixált szövetek hajlamosak a fagyasztva száradásra, és ideális esetben a kriofixálás után azonnal metszeni kell őket, vagy olyan körülmények között kell tárolni, amelyek minimalizálják a fagyasztva száradást.

A Shandon FE kriosztát jellemzői

• érintőképernyős kijelző a metszési paraméterek beállításához
• A metszetvastagság beállítása 1-20 μm 1μm-es beállításokban és 20-60 μm 5μm-es beállításokban
• Vertikális vágási löket 57mm
• Vízszintes mintaelőtolás 25 mm
• Kriokamra hőmérsékletszabályozás 0°-tól -35°C-ig
• Kriokamra és dedikáltan állítható kriokamra hűtőrendszer -55°C-ig. A kriobár hűtőrendszer akár két óra alatt lehűti a mintát, miközben megakadályozza a fagyást
• A mintatartó hőmérsékletének szabályozása 0°-tól 40°C-ig (±10° a kamrahőmérséklethez képest)
• Pozitív reteszelő lendkerék a sérülések elkerülése érdekében a penge és a minta körül végzett munka során
• Automata füstölési ciklus a kamra fertőtlenítésére
• CFC-fluoridot használ.mentes hűtőközegeket és habszigetelést használ
• Kettős kompresszoros rendszer biztosítja a minták épségét azáltal, hogy a kriobár meghibásodása esetén a minták fagyasztva maradnak
• Ergonomikus kialakítás, beleértve a három szinten állítható lábtartót, amely segít csökkenteni a fáradtságot ülés vagy állás közben, valamint a megemelt vágási területet, amely segít megelőzni a hát megerőltetését a szeletelés során