Un set extins de instrumente „Brainbow” pentru marcarea fluorescentă a celulelor la șoareci

Complexitatea creierului și a altor organe face ca identificarea conexiunilor dintre celulele individuale să fie o provocare descurajantă. Dezvoltarea tehnologiei „Brainbow” a permis mari progrese în domeniul imagisticii prin exploatarea sistemului Cre/lox pentru a atribui în mod aleatoriu fiecărei celule o combinație unică de proteine fluorescente roșii, galbene și albastre (Livet et al. 2007). Sistemul funcționează într-un mod similar cu tuburile catodice, care combină lumina roșie, verde și albastră pentru a genera întregul spectru de culori pe un ecran de televiziune. Șoarecii Brainbow dezvoltați recent de laboratorul lui Joshua Sanes de la Harvard extind setul de instrumente cu tulpini mai bune pentru a studia modul în care neuronii interrelaționează (Cai et al. 2013), în timp ce alte tulpini înrudite aduc tehnologia Brainbow la nivelul întregului șoarece (Snippert et al. 2010; Tabansky et al. 2013).

Noile linii Brainbow (numite Brainbow 3.1 și 3.2) oferă mai multe avantaje față de modelele Brainbow originale:

• În comparație cu tulpinile originale, nu există fluorescență înainte de recombinarea Cre, care ar putea complica imagistica.
• Țintirea proteinelor fluorescente pe membrane permite o mai bună vizualizare a proceselor neuronale și a spinalelor dendritice.
• Fluorescența este mai strălucitoare, în special la șoarecii Brainbow 3.2.

The Jackson Laboratory distribuie două tipuri diferite de șoareci Brainbow 3.2.2.1 tulpini, STOCK Tg(Thy1-Brainbow3.1)3Jrs/J (021225) și STOCK Tg(Thy1-Brainbow3.1)18Jrs/J (021226), care vizează mai multe tipuri de neuroni . O tulpină Brainbow 3.2, cu o expresie îmbunătățită a proteinei fluorescente, este disponibilă ca STOCK Tg(Thy1-Brainbow3.2)7Jrs/J (021227).

Brainbow nu mai este doar pentru creiere. Tehnologia a fost adaptată pentru utilizare generală oriunde în șoarece. Tulpini precum „Confetti”, B6.129P2-Gt(ROSA)26Sortm1(CAG-Brainbow2.1)Cle/J (017492), poartă o inserție a unei transgene Brainbow în locusul Rosa26 care este exprimată în întregul șoarece (Snippert et al. 2010). În prezent, celulele unice pot fi marcate în aproape orice tip de țesut prin împerecherea șoarecilor Confetti cu șoareci transgenici Cre care vizează țesuturi specifice. Șoarecii Confetti au fost utilizați pentru a înțelege modul în care celulele stem se divid în intestine, plămâni, măduvă osoasă și alte țesuturi. B6(D2)-Tg(CAG-Brainbow1.0)2Eggn/J (021011) este o tulpină similară care utilizează promotorul actinei pentru a marca celulele din orice parte a șoarecelui cu una dintre cele 21 de culori diferite în urma recombinării Cre (Tabansky, et al. 2013).

Grupul de instrumente Brainbow extins conține acum un set diversificat de tulpini pentru imagistica diferitelor țesuturi la nivelul întregului șoarece și pentru a sprijini disecția funcțiilor și arhitecturilor celulare complexe.

.