Integrated Microscopy Center

Similar cu un microtometru standard, un criostat are rolul de a obține secțiuni subțiri (1-10 mm grosime) dintr-o bucată de țesut, dar în timp ce un microtometru standard efectuează operația la temperatura camerei, criostatul permite operatorului să secționeze țesutul la temperaturi scăzute (-20 până la -30 C). Într-un criostat, lama și proba se află în interiorul unui congelator/cameră staționară verticală, în timp ce roata pentru rotirea suportului de probă se află în exterior.

Tesuturile pentru secționarea în criostat nu trebuie să fie fixate în formol timp de ore sau zile, așa cum se întâmplă în cazul histologiei de rutină. În schimb, țesuturile sunt criofixate imediat după prelevare. Pentru criofixare, bucățile de țesut sunt plasate într-un mediu vâscos, asemănător unui gel (OCT) și sunt scufundate în izopentan răcit cu gheață carbonică sau azot lichid.

Pentru secționare, blocurile de țesut OCT congelate sunt plasate pe o placă metalică care le aduce temperatura la -20 până la -30 C. Odată ce această temperatură este atinsă, specimenul este montat pe mandrina microtomului și secționat. După ce se obțin secțiuni de o calitate satisfăcătoare, acestea sunt montate pe o lamă de sticlă la temperatura camerei (~20 C). Temperatura mai ridicată a lamei de sticlă în raport cu cea a secțiunii de țesut face ca secțiunea să se topească instantaneu și să adere la sticlă.

Întregul proces, de la criofixare până la obținerea secțiunilor pe lame de sticlă, poate dura doar 10-20 de minute, permițând o analiză rapidă a probelor.

Aplicații

Secționarea cu criostat oferă două avantaje principale față de secționarea standard cu microtomul histologic. În primul rând, timpul de execuție de la fixare până la secționarea țesutului este mult mai scurt. În al doilea rând, antigenitatea proteinelor este mai bine conservată și, prin urmare, secțiunile de criostat sunt bine adaptate pentru colorarea prin imunofluorescență a mai multor proteine în aceeași secțiune de țesut.

Dezavantajul secționării criostatice față de secționarea histologică standard cu microtomul este acela că caracteristicile citologice ale secțiunilor de țesut incluse în parafină colorate cu hematoxilină-eozină (H&E) sunt superioare celor ale secțiunilor criostatice colorate cu H&E. Acest lucru se datorează faptului că în timpul procesului de criofixare se pot forma cristale de gheață care vor denatura citoarhitectura. În plus, țesuturile criofixate încorporate în OCT au tendința de a se liofiliza și, în mod ideal, ar trebui secționate imediat după criofixare sau depozitate în condiții care să minimizeze liofilizarea.

Specificații ale criostatului Shandon FE

• Afișaj cu ecran tactil pentru configurarea parametrilor de secționare
• Reglarea grosimii secțiunii 1-20 μm în reglaje de 1μm și 20-60 μm în reglaje de 5μm
• Cursă de tăiere verticală de 57 mm
• Avansare orizontală a epruvetei de 25 mm
• Controlul temperaturii în criocameră de la 0° la -35°C
• Criobar și sistem de răcire a criobarului dedicat reglabil până la -55°C. Sistemul de refrigerare cryobar răcește specimenul în doar două ore, prevenind în același timp înghețarea
• Controlul temperaturii suportului de specimen de la 0° la 40°C (±10° din temperatura camerei)
• Volant cu blocare pozitivă pentru a preveni rănirea în timpul lucrului în jurul lamei și specimenului
• Ciclu automat de fumigație pentru dezinfectarea camerei
• Utilizează CFC-refrigeranți fără CFC și izolație din spumă
• Sistem de compresor dublu pentru a asigura integritatea specimenelor, menținând specimenele înghețate în cazul în care criobarul cedează
• Design ergonomic, inclusiv un suport pentru picioare reglabil pe trei niveluri pentru a ajuta la reducerea oboselii în timpul șederii sau stării în picioare și o zonă de tăiere înălțată pentru a ajuta la prevenirea oboselii spatelui în timpul secționării

.