Um kit de ferramentas Brainbow expandido para rotulagem fluorescente de células em ratos

A complexidade do cérebro e de outros órgãos torna a identificação das ligações entre as células individuais um desafio assustador. O desenvolvimento da tecnologia “Brainbow” tem permitido grandes avanços em imagens, explorando o sistema Cre/lox para atribuir aleatoriamente a cada célula uma combinação única de proteínas fluorescentes vermelhas, amarelas e azuis (Livet et al. 2007). O sistema funciona de forma semelhante aos tubos de raios catódicos, que combinam luz vermelha, verde e azul para gerar todo o espectro de cores em uma tela de TV. Ratos Brainbow recentemente desenvolvidos do laboratório de Joshua Sanes em Harvard expandem o kit de ferramentas com cepas melhores para estudar como os neurônios se inter-relacionam (Cai et al. 2013), enquanto outras cepas relacionadas trazem a tecnologia Brainbow para o mouse inteiro (Snippert et al. 2010; Tabansky et al. 2013).

As novas linhas Brainbow (chamadas Brainbow 3.1 e 3.2) oferecem várias vantagens sobre os modelos Brainbow originais:

• Não há nenhuma fluorescência antes da recombinação de Brainbow que possa complicar a imagem.
• O direcionamento das proteínas fluorescentes para as membranas permite uma melhor visualização dos processos neuronais e espinhas dendríticas.
• Fluorescência é mais brilhante, especialmente nos ratos do Brainbow 3.2.

O Laboratório Jackson distribui dois Brainbow 3 diferentes.1 estirpes, STOCK Tg(Thy1-Brainbow3.1)3Jrs/J (021225) e STOCK Tg(Thy1-Brainbow3.1)18Jrs/J (021226), que visam muitos tipos de neurônios . Uma linhagem Brainbow 3.2, com expressão de proteína fluorescente melhorada, está disponível como STOCK Tg(Thy1-Brainbow3.2)7Jrs/J (021227).

Brainbow não é mais apenas para cérebros. A tecnologia foi adaptada para uso geral em qualquer lugar do mouse. Estirpes como “Confetti,” B6.129P2-Gt(ROSA)26Sortm1(CAG-Brainbow2.1)Cle/J (017492), levam uma inserção de um transgene Brainbow no locus Rosa26 que é expresso em todo o rato (Snippert et al. 2010). As células únicas podem agora ser etiquetadas em praticamente qualquer tipo de tecido através do acasalamento de ratos Confetti com ratos Cre transgénicos que têm como alvo tecidos específicos. Os ratos Confetti têm sido utilizados para compreender como as células estaminais se dividem no intestino, pulmão, medula óssea e outros tecidos. B6(D2)-Tg(CAG-Brainbow1.0)2Eggn/J (021011) é uma linhagem semelhante que usa o promotor actin para rotular as células em qualquer parte do rato com uma de até 21 cores diferentes após a recombinação de Cre (Tabansky, et al. 2013).

O kit de ferramentas Brainbow expandido agora contém um conjunto diversificado de cepas para a imagem de diferentes tecidos através do mouse e para suportar a dissecção de funções celulares complexas e arquiteturas.