Integrated Microscopy Center

Podobny do standardowego mikrotomu, kriostat służy do uzyskiwania cienkich (o grubości 1-10 mm) przekrojów z kawałka tkanki, ale podczas gdy standardowy mikrotom wykonuje tę czynność w temperaturze pokojowej, kriostat umożliwia operatorowi wykonanie przekroju tkanki w niskiej temperaturze (-20 do -30 C). W kriostacie, ostrze i próbka są umieszczone wewnątrz pionowej stacjonarnej komory zamrażarki/komory, podczas gdy koło do obracania uchwytu próbki jest umieszczone na zewnątrz.

Tkanki do sekcjonowania w kriostacie nie muszą być utrwalane w formalinie przez godziny lub dni, jak to ma miejsce w przypadku rutynowej histologii. Zamiast tego, tkanki są natychmiast utrwalane w kriokomorze po pobraniu próbki. W celu utrwalenia, kawałki tkanki są umieszczane w lepkim, żelopodobnym medium (OCT) i zanurzane w izopentanie schłodzonym suchym lodem lub ciekłym azotem.

Do sekcjonowania, zamrożone bloki tkanek OCT są umieszczane na metalowej płycie, która podnosi ich temperaturę do -20 do -30 C. Po osiągnięciu tej temperatury, próbka jest montowana na uchwycie mikrotomu i sekcjonowana. Po uzyskaniu przekrojów o zadowalającej jakości, są one montowane na szkiełku szklanym w temperaturze pokojowej (~20 C). Wyższa temperatura szkiełka szklanego w stosunku do temperatury wycinka tkanki powoduje, że wycinek natychmiast się topi i przylega do szkła.

Cały proces od kriofiksacji do uzyskania wycinków na szkiełkach szklanych może trwać zaledwie 10 do 20 minut, co pozwala na szybką analizę próbki.

Zastosowania

Wycinanie przy użyciu kriostatu oferuje dwie główne zalety w porównaniu ze standardowym wycinaniem histologicznym przy użyciu mikrotomu. Po pierwsze, czas od utrwalenia do sekcjonowania tkanki jest znacznie krótszy. Po drugie, antygenowość białka jest lepiej zachowana i dlatego przekroje kriostatyczne są dobrze przystosowane do barwienia immunofluorescencyjnego wielu białek w tym samym przekroju tkankowym.

Wadą sekcjonowania w kriostacie w porównaniu ze standardowym histologicznym sekcjonowaniem mikrotomowym jest to, że cechy cytologiczne wycinków tkanek osadzonych w parafinie barwionych hematoksyliną-eozyną (H&E) są lepsze niż cechy wycinków kriostatycznych barwionych H&E. Wynika to z faktu, że podczas procesu utrwalania w kriokomorze mogą tworzyć się kryształki lodu, które zniekształcają cytoarchitekturę. Ponadto, tkanki utrwalone w procesie kriofiksacji osadzone w OCT mają tendencję do liofilizacji i najlepiej byłoby, gdyby sekcje były wykonywane natychmiast po kriofiksacji lub przechowywane w warunkach minimalizujących liofilizację.

Specyfikacje kriostatu Shandon FE

• Wyświetlacz dotykowy do ustawiania parametrów sekcjonowania
• Regulacja grubości sekcji 1-.20 μm w regulacjach 1μm i 20-60 μm w regulacjach 5μm
• Pionowy skok cięcia 57mm
• Poziomy posuw próbki 25 mm
• Regulacja temperatury kriokomory 0° do -35°C
• Kriobar i dedykowany regulowany system chłodzenia kriobaru do -55°C. System chłodzenia kriobaru chłodzi próbkę w ciągu zaledwie dwóch godzin, zapobiegając jej zamrożeniu
• Kontrola temperatury uchwytu próbki 0° do 40°C (±10° temperatury komory)
• Koło zamachowe z blokadą zapobiegającą obrażeniom podczas pracy wokół ostrza i próbki
• Automatyczny cykl fumigacji do dezynfekcji komory
• Użycie czynników chłodniczych niezawierających CFC-wolne od CFC czynniki chłodnicze i izolacja piankowa
• System podwójnej sprężarki zapewniający integralność próbek poprzez utrzymywanie ich w stanie zamrożenia w przypadku awarii kriobaru
• Ergonomiczna konstrukcja obejmująca regulowany w trzech płaszczyznach podnóżek, który pomaga zmniejszyć zmęczenie podczas siedzenia lub stania oraz podwyższony obszar cięcia, który pomaga zapobiegać nadwyrężeniu pleców podczas sekcjonowania

.