Integrated Microscopy Center

Gelijk aan een standaard microtoom, dient een cryostat om dunne (1-10 mm dikke) coupes van een stukje weefsel te verkrijgen, maar terwijl een standaard microtoom de bewerking bij kamertemperatuur uitvoert, stelt de cryostat de operator in staat het weefsel bij lage temperatuur te couperen (-20 tot -30 C). In een cryostaat bevinden het mes en het monster zich in een rechtopstaande stationaire vriezer/kamer, terwijl het wiel voor het roteren van de monsterhouder zich aan de buitenkant bevindt.

Weefsels voor coupes in een cryostaat hoeven niet uren- of dagenlang in formaline te worden gefixeerd, zoals het geval is bij routinehistologie. In plaats daarvan worden de weefsels onmiddellijk na de afname gecryofixeerd. Voor cryofixatie worden de weefselstukken in een viskeus, gelachtig medium (OCT) geplaatst en ondergedompeld in isopentaan dat met droog ijs of vloeibare stikstof wordt gekoeld.

Voor het snijden worden de bevroren OCT-weefselblokken op een metalen plaat geplaatst die hun temperatuur op -20 tot -30 C brengt. Zodra die temperatuur is bereikt, wordt het specimen op de microtoomhouder gemonteerd en gesneden. Zodra coupes van een bevredigende kwaliteit zijn verkregen, worden zij op een glasplaatje bij kamertemperatuur (~20 C) gemonteerd. Door de hogere temperatuur van het glasglaasje ten opzichte van de weefselsectie smelt de sectie onmiddellijk en hecht zich aan het glas.

Het hele proces van cryofixatie tot het verkrijgen van secties op glasplaatjes kan slechts 10 tot 20 minuten duren, waardoor snelle monsteranalyse mogelijk is.

Toepassingen

Cryostat sectioning biedt twee belangrijke voordelen ten opzichte van standaard histologie microtoom snijden. Ten eerste, de doorlooptijd van fixatie tot weefsel sectie is veel korter. Ten tweede, eiwit antigeniciteit is beter bewaard gebleven en daarom cryostaat secties zijn zeer geschikt voor immunofluorescentie kleuring van meerdere eiwitten in hetzelfde weefsel sectie.

Het nadeel van cryostaat coupes ten opzichte van standaard histologie microtoom coupes is dat de cytologische kenmerken van hematoxyline-eosine (H&E) gekleurd paraffine ingebedde weefsel secties zijn superieur aan die van H&E gekleurd cryostaat secties. Dit komt omdat zich tijdens het cryofixatieproces ijskristallen kunnen vormen die de cytoarchitectuur vervormen. Bovendien hebben in OCT ingebedde gecryofixeerde weefsels de neiging om te vriesdrogen en moeten idealiter onmiddellijk na cryofixatie worden doorgesneden of worden bewaard onder omstandigheden die vriesdrogen minimaliseren.

Specificaties van de Shandon FE Cryostat

• Touch screen display voor het instellen van sectioning parameters
• Sectie dikte aanpassing 1-20 μm in 1μm aanpassingen en 20-60 μm in 5μm aanpassingen
• Verticale snijslag 57mm
• Horizontale preparaatvooruitgang van 25 mm
• Cryokamertemperatuurregeling 0° tot -35°C
• Cryobar en specifiek instelbaar cryobar koelsysteem tot -55°C. Het koelsysteem van de cryobar koelt het specimen in slechts twee uur af en voorkomt bevriezing
• Temperatuurregeling van de specimenhouder 0° tot 40°C (±10° van de kamertemperatuur)
• Positief vergrendelend vliegwiel om verwondingen te voorkomen tijdens het werken rond mes en specimen
• Automatische fumigatiecyclus om kamer te desinfecteren
• Gebruikt CFC-vrije koelmiddelen en schuimisolatie
• Dubbel compressorsysteem om de integriteit van het monster te garanderen door het bevroren te houden als de cryobar uitvalt
• Ergonomisch ontwerp met een verstelbare voetsteun op drie niveaus om vermoeidheid te verminderen tijdens het zitten of staan en een verhoogd snijgedeelte om rugklachten tijdens het snijden te helpen voorkomen