Centre de microscopie intégré

Similaire à un microtome standard, un cryostat fonctionne pour obtenir des sections fines (1-10 mm d’épaisseur) d’un morceau de tissu, mais alors qu’un microtome standard effectue l’opération à température ambiante, le cryostat permet à l’opérateur de sectionner le tissu à basse température (-20 à -30 C). Dans un cryostat, la lame et l’échantillon sont situés à l’intérieur d’un congélateur/chambre stationnaire vertical tandis que la roue permettant de faire tourner le porte-échantillon est située à l’extérieur.

Les tissus destinés à être sectionnés au cryostat n’ont pas besoin d’être fixés dans du formol pendant des heures ou des jours, comme c’est le cas pour l’histologie de routine. Au lieu de cela, les tissus sont immédiatement cryofixés après le prélèvement. Pour la cryofixation, les morceaux de tissus sont placés dans un milieu visqueux ressemblant à un gel (OCT) et sont plongés dans de l’isopentane refroidi avec de la glace sèche ou de l’azote liquide.

Pour la section, les blocs de tissus congelés OCT sont placés sur une plaque métallique qui porte leur température à -20 à -30 C. Une fois cette température atteinte, le spécimen est monté sur le mandrin du microtome et sectionné. Une fois que des sections de qualité satisfaisante sont obtenues, elles sont montées sur une lame de verre à température ambiante (~20 C). La température plus élevée de la lame de verre par rapport à celle de la section de tissu provoque la fusion instantanée de la section et son adhésion au verre.

L’ensemble du processus, de la cryofixation à l’obtention des sections sur les lames de verre, peut prendre seulement 10 à 20 minutes, ce qui permet une analyse rapide des échantillons.

Applications

La section par cryostat offre deux avantages principaux par rapport à la section standard par microtome en histologie. Premièrement, le délai d’exécution entre la fixation et la section du tissu est beaucoup plus court. Deuxièmement, l’antigénicité des protéines est mieux préservée et les coupes au cryostat sont donc bien adaptées à la coloration par immunofluorescence de plusieurs protéines dans la même coupe de tissu.

L’inconvénient de la coupe au cryostat par rapport à la coupe au microtome en histologie standard est que les caractéristiques cytologiques des coupes de tissus incluses dans la paraffine et colorées à l’hématoxyline-éosine (H&E) sont supérieures à celles des coupes au cryostat colorées à l’H&E. En effet, des cristaux de glace peuvent se former pendant le processus de cryofixation, ce qui déforme la cytoarchitecture. En outre, les tissus cryofixés inclus dans l’OCT ont tendance à se lyophiliser et, idéalement, ils doivent être sectionnés immédiatement après la cryofixation ou stockés dans des conditions qui minimisent la lyophilisation.

Spécifications du cryostat Shandon FE

• Écran tactile pour le réglage des paramètres de sectionnement
• Réglage de l’épaisseur de la section 1-.20 μm en ajustements de 1μm et 20-60 μm en ajustements de 5μm
• Course de coupe verticale de 57mm
• Avance horizontale de l’échantillon de 25 mm
• Régulation de la température de la cryochambre de 0° à -35°C
• Cryobar et système de réfrigération cryobar réglable dédié à -55°C. Le système de réfrigération cryobar refroidit les spécimens en deux heures seulement tout en empêchant la congélation
• Régulation de la température du porte-spécimen de 0° à 40°C (±10° de la température de la chambre)
• Molette à verrouillage positif pour éviter les blessures lors du travail autour de la lame et du spécimen
• Cycle de fumigation automatique pour désinfecter la chambre
• Utilise des réfrigérants sans CFC-.et une isolation en mousse
• Système à double compresseur pour garantir l’intégrité des spécimens en les maintenant congelés en cas de défaillance du cryobar
• Conception ergonomique comprenant un repose-pieds réglable à trois niveaux pour aider à réduire la fatigue en position assise ou debout et une zone de coupe surélevée pour aider à prévenir les tensions dorsales lors du sectionnement

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