Centro Integrado de Microscopía

Similar a un micrótomo estándar, un criostato funciona para obtener secciones finas (de 1 a 10 mm de grosor) de un trozo de tejido, pero mientras que un micrótomo estándar realiza la operación a temperatura ambiente, el criostato permite al operador seccionar el tejido a baja temperatura (-20 a -30 C). En un criostato, la cuchilla y la muestra se encuentran dentro de un congelador/cámara estacionaria vertical, mientras que la rueda para girar el soporte de la muestra se encuentra en el exterior.

Los tejidos para el seccionamiento en criostato no necesitan ser fijados en formol durante horas o días, como es el caso de la histología de rutina. En su lugar, los tejidos se criofijan inmediatamente después de la toma de muestras. Para la criofijación, las piezas de tejido se colocan en un medio viscoso y gelatinoso (OCT) y se sumergen en isopentano enfriado con hielo seco o nitrógeno líquido.

Para el seccionamiento, los bloques de tejido OCT congelados se colocan en una placa metálica que lleva su temperatura a -20 a -30 C. Una vez alcanzada esa temperatura, el espécimen se monta en el mandril del micrótomo y se secciona. Una vez obtenidas secciones de calidad satisfactoria, se montan en un portaobjetos de vidrio a temperatura ambiente (~20 C). La mayor temperatura del portaobjetos de vidrio en relación con la de la sección de tejido hace que la sección se funda instantáneamente y se adhiera al vidrio.

Todo el proceso, desde la criofijación hasta la obtención de secciones en portaobjetos de vidrio, puede durar entre 10 y 20 minutos, lo que permite un rápido análisis de las muestras.

Aplicaciones

El seccionamiento con criostato ofrece dos ventajas principales sobre el seccionamiento estándar con micrótomo para histología. En primer lugar, el tiempo que transcurre desde la fijación hasta la sección del tejido es mucho más corto. En segundo lugar, la antigenicidad de las proteínas se conserva mejor y, por lo tanto, las secciones de criostato son muy adecuadas para la tinción de inmunofluorescencia de múltiples proteínas en la misma sección de tejido.

La desventaja del seccionamiento con criostato respecto al seccionamiento con micrótomo histológico estándar es que las características citológicas de las secciones de tejido embebidas en parafina teñidas con hematoxilina-eosina (H&E) son superiores a las de las secciones con criostato teñidas con H&E. Esto se debe a que durante el proceso de criofijación pueden formarse cristales de hielo que distorsionan la citoarquitectura. Además, los tejidos criofijados incrustados en OCT tienden a liofilizarse y lo ideal es seccionarlos inmediatamente después de la criofijación o almacenarlos en condiciones que minimicen la liofilización.

Especificaciones del criostato Shandon FE

• Pantalla táctil para configurar los parámetros de seccionamiento
• Ajuste del grosor de la sección 1-20 μm en ajustes de 1μm y 20-60 μm en ajustes de 5μm
• Carrera de corte vertical de 57 mm
• Avance horizontal de la muestra de 25 mm
• Control de la temperatura de la criocámara de 0° a -35°C
• Sistema de refrigeración del criobar y del criobar dedicado ajustable hasta -55°C. El sistema de refrigeración del criobar enfría la muestra en tan sólo dos horas, evitando que se congele
• Control de la temperatura del portamuestras de 0° a 40°C (±10° de la temperatura de la cámara)
• Rueda de inmovilización positiva para evitar lesiones al trabajar alrededor de la cuchilla y la muestra
• Ciclo de fumigación automático para desinfectar la cámara
• Utiliza refrigerantes sin CFC y aislamiento de espuma

.y aislamiento de espuma

• Sistema de doble compresor para garantizar la integridad de las muestras, manteniéndolas congeladas si el criobar falla
• Diseño ergonómico que incluye un reposapiés ajustable en tres niveles para ayudar a reducir la fatiga mientras se está sentado o de pie y una zona de corte elevada para ayudar a evitar la tensión en la espalda mientras se secciona