Integrated Microscopy Center

Kryostat slouží podobně jako standardní mikrotom k získání tenkých (1-10 mm silných) řezů z kusu tkáně, ale zatímco standardní mikrotom provádí operaci při pokojové teplotě, kryostat umožňuje obsluze řezat tkáň při nízké teplotě (-20 až -30 C). V kryostatu je čepel a vzorek umístěn ve svislé stacionární mrazicí komoře, zatímco kolečko pro otáčení držáku vzorku je umístěno vně.

Tkáně určené k řezání v kryostatu není třeba fixovat ve formalínu po dobu několika hodin nebo dnů, jako je tomu v případě běžné histologie. Místo toho se tkáně kryofixují ihned po odběru vzorků. Pro kryofixaci se kousky tkáně umístí do viskózního gelovitého média (OCT) a ponoří se do izopentanu chlazeného suchým ledem nebo kapalným dusíkem.

Pro řezání se zmrazené bloky tkáně OCT umístí na kovovou desku, čímž se jejich teplota sníží na -20 až -30 C. Po dosažení této teploty se vzorek nasadí na sklíčidlo mikrotomu a provede se řez. Jakmile jsou získány řezy uspokojivé kvality, upevní se na skleněné sklíčko při pokojové teplotě (~20 C). Vyšší teplota sklíčka v porovnání s teplotou tkáňového řezu způsobí, že se řez okamžitě roztaví a přilne ke sklu.

Celý proces od kryofixace po získání řezů na skleněných sklíčkách může trvat pouhých 10 až 20 minut, což umožňuje rychlou analýzu vzorku.

Použití

Kryostatické řezání nabízí dvě hlavní výhody oproti standardnímu řezání histologickými mikrotomy. Zaprvé, doba od fixace po řez tkání je mnohem kratší. Za druhé, antigenicita proteinů je lépe zachována, a proto jsou kryostatové řezy vhodné pro imunofluorescenční barvení více proteinů v jednom tkáňovém řezu.

Nevýhodou kryostatových řezů oproti standardním histologickým řezům z mikrotomu je, že cytologické vlastnosti hematoxylin-eosinem (H&E) obarvených parafinových řezů zalitých tkání jsou lepší než vlastnosti H&E obarvených kryostatových řezů. Je to proto, že během kryofixace se mohou tvořit krystalky ledu, které zkreslí cytoarchitekturu. Kromě toho mají kryofixované tkáně vložené do OCT tendenci vymrzat a v ideálním případě by měly být řezy vyříznuty ihned po kryofixaci nebo uloženy za podmínek, které minimalizují vymrzání.

Specifikace kryostatu Shandon FE

• Dotykový displej pro nastavení parametrů řezu
• Nastavení tloušťky řezu 1-.20 μm v nastavení po 1 μm a 20-60 μm v nastavení po 5 μm
• Vertikální řezný zdvih 57 mm
• Horizontální posuv vzorku 25 mm
• Regulace teploty v kryokomoře 0° až -35 °C
• Kryobar a speciální nastavitelný systém chlazení kryobaru do -55 °C. Chladicí systém kryobaru ochladí vzorek již za dvě hodiny a zároveň zabrání jeho zmrznutí
• Řízení teploty držáku vzorku 0° až 40°C (±10° teploty v komoře)
• Pozitivní blokovací setrvačník, který zabraňuje zranění při práci kolem lopatky a vzorku
• Automatický fumigační cyklus k dezinfekci komory
• Používá CFC-.a pěnovou izolaci
• Systém dvojitého kompresoru zajišťuje integritu vzorků tím, že je udržuje zmrazené, pokud kryobar selže
• Ergonomický design včetně třístupňové nastavitelné opěrky nohou, která pomáhá snižovat únavu při sezení nebo stání, a zvýšené řezné plochy, která pomáhá předcházet namáhání zad při řezání

.