Rozszerzony zestaw narzędzi „Brainbow” do znakowania fluorescencyjnego komórek u myszy

Złożoność mózgu i innych narządów sprawia, że identyfikacja połączeń między poszczególnymi komórkami jest zniechęcającym wyzwaniem. Rozwój technologii „Brainbow” umożliwił wielki postęp w obrazowaniu poprzez wykorzystanie systemu Cre/lox do losowego przypisania każdej komórce unikalnej kombinacji czerwonego, żółtego i niebieskiego białka fluorescencyjnego (Livet et al. 2007). System ten działa podobnie jak kineskopy, które łączą światło czerwone, zielone i niebieskie, aby wygenerować pełne spektrum kolorów na ekranie telewizora. Ostatnio opracowane myszy Brainbow z laboratorium Joshuy Sanesa na Harvardzie rozszerzają zestaw narzędzi o lepsze szczepy do badania, jak neurony współdziałają ze sobą (Cai et al. 2013), podczas gdy inne pokrewne szczepy wprowadzają technologię Brainbow do całej myszy (Snippert et al. 2010; Tabansky et al. 2013).

Nowe linie Brainbow (nazwane Brainbow 3.1 i 3.2) oferują kilka zalet w stosunku do oryginalnych modeli Brainbow:

• W przeciwieństwie do oryginalnych szczepów, nie ma fluorescencji przed rekombinacją Cre, która mogłaby skomplikować obrazowanie.
• Skierowanie białek fluorescencyjnych do błon pozwala na lepszą wizualizację procesów neuronalnych i kolców dendrytycznych.
• Fluorescencja jest jaśniejsza, szczególnie u myszy Brainbow 3.2.

The Jackson Laboratory distributes two different Brainbow 3.1, STOCK Tg(Thy1-Brainbow3.1)3Jrs/J (021225) i STOCK Tg(Thy1-Brainbow3.1)18Jrs/J (021226), które są ukierunkowane na wiele typów neuronów. Szczep Brainbow 3.2, o zwiększonej ekspresji białka fluorescencyjnego, jest dostępny jako STOCK Tg(Thy1-Brainbow3.2)7Jrs/J (021227).

Brainbow nie jest już tylko dla mózgów. Technologia ta została zaadaptowana do ogólnego zastosowania w dowolnym miejscu na myszy. Szczepy takie jak „Confetti”, B6.129P2-Gt(ROSA)26Sortm1(CAG-Brainbow2.1)Cle/J (017492), posiadają insercję transgenu Brainbow w locus Rosa26, który ulega ekspresji u całej myszy (Snippert et al. 2010). Pojedyncze komórki mogą być obecnie znakowane w praktycznie każdym typie tkanki poprzez kojarzenie myszy Confetti z myszami transgenicznymi Cre, które są ukierunkowane na konkretne tkanki. Myszy Confetti zostały wykorzystane do zrozumienia, jak dzielą się komórki macierzyste w jelitach, płucach, szpiku kostnym i innych tkankach. B6(D2)-Tg(CAG-Brainbow1.0)2Eggn/J (021011) jest podobnym szczepem, który wykorzystuje promotor aktyny do znakowania komórek w dowolnym miejscu myszy jednym z maksymalnie 21 różnych kolorów po rekombinacji Cre (Tabansky, et al. 2013).

Rozszerzony zestaw narzędzi Brainbow zawiera teraz zróżnicowany zestaw szczepów do obrazowania różnych tkanek w całej myszy i wspierania dysekcji złożonych funkcji i architektur komórkowych.

.