Rozšířená sada nástrojů „Brainbow“ pro fluorescenční značení buněk u myší

Složitost mozku a dalších orgánů činí z identifikace spojení mezi jednotlivými buňkami náročný úkol. Vývoj technologie „Brainbow“ umožnil velký pokrok v zobrazování díky využití systému Cre/lox k náhodnému přiřazení každé buňce jedinečné kombinace červených, žlutých a modrých fluorescenčních proteinů (Livet et al. 2007). Systém funguje podobně jako katodové trubice, které kombinují červené, zelené a modré světlo a vytvářejí tak plné spektrum barev na televizní obrazovce. Nedávno vyvinuté myši Brainbow z laboratoře Joshuy Sanese na Harvardu rozšiřují sadu nástrojů o lepší kmeny pro studium vzájemných vztahů mezi neurony (Cai et al. 2013), zatímco další příbuzné kmeny přinášejí technologii Brainbow pro celou myš (Snippert et al. 2010; Tabansky et al. 2013).

Nové linie Brainbow (nazvané Brainbow 3.1 a 3.2) nabízejí oproti původním modelům Brainbow několik výhod:

• Na rozdíl od původních kmenů nedochází před rekombinací Cre k fluorescenci, která by mohla komplikovat zobrazování.
• Cílení fluorescenčních proteinů na membrány umožňuje lepší vizualizaci neuronálních procesů a dendritických trnů.
• Fluorescence je jasnější, zejména u myší Brainbow 3.2. V případě myší Brainbow 3.2 je fluorescence jasnější.

Laboratoř Jackson Laboratory distribuuje dva různé typy myší Brainbow 3.792.1, STOCK Tg(Thy1-Brainbow3.1)3Jrs/J (021225) a STOCK Tg(Thy1-Brainbow3.1)18Jrs/J (021226), které jsou zaměřeny na mnoho typů neuronů . Kmen Brainbow 3.2 se zvýšenou expresí fluorescenčního proteinu je k dispozici jako STOCK Tg(Thy1-Brainbow3.2)7Jrs/J (021227).

Brainbow už není jen pro mozky. Tato technologie byla přizpůsobena pro obecné použití kdekoli na myších. Kmeny jako „Confetti“, B6.129P2-Gt(ROSA)26Sortm1(CAG-Brainbow2.1)Cle/J (017492), nesou inserci transgenu Brainbow do lokusu Rosa26, který je exprimován v celé myši (Snippert et al. 2010). Jednotlivé buňky lze nyní označit prakticky v jakémkoli typu tkáně párováním myší Confetti s transgenními myšmi Cre, které se zaměřují na specifické tkáně. Myši Confetti byly použity k pochopení toho, jak se kmenové buňky dělí ve střevech, plicích, kostní dřeni a dalších tkáních. B6(D2)-Tg(CAG-Brainbow1.0)2Eggn/J (021011) je podobný kmen, který využívá aktinový promotor k označení buněk kdekoli v myši jednou z až 21 různých barev po rekombinaci Cre (Tabansky, et al. 2013).

Rozšířená sada nástrojů Brainbow nyní obsahuje rozmanitou sadu kmenů pro zobrazování různých tkání v celé myši a pro podporu pitvy komplexních buněčných funkcí a architektur.

.