Vad är skillnaderna mellan FPLC och HPLC

FPLC står för snabb proteinvätskekromatografi och HPLC står för högpresterande vätskekromatografi. Även om de båda teknikerna liknar varandra finns det betydande skillnader i deras kromatografiska metoder. HPLC är en analysteknik som främst används för kvantitativ och kvalitativ analys av flytande prover. Å andra sidan är FPLC en reningsteknik som används för att separera proteinblandningar och samla in de separerade komponenterna av intresse. Medan både HPLC och FPLC använder pumpar, detektorer, ventiler och programvara, använder FPLC också pH- och konduktivitetsmätare samt fraktionsuppsamlare. Ett annat sätt att skilja HPLC från FPLC är att HPLC anses vara en analytisk teknik medan FPLC är en preparativ teknik.

I HPLC används flera metoder för separationer där omvänd fas-kromatografi är den vanligaste. HPLC använder lösningsmedel för den rörliga fasen och FPLC använder saltbuffertar för den rörliga fasen. I FPLC används flera reningsmetoder, bland annat jonbyte, gelfiltrering och affinitet samt andra mindre använda metoder. FPLC-rening är vanligtvis en flerstegsprocess som innefattar en kombination av metoder.

HPLC-pumphuvuden är tillverkade av rostfritt stål och flödeskapaciteten överstiger vanligtvis inte 10 ml/min, medan mottryckskapaciteten vanligtvis är 6000 psi och högre. FPLC-pumphuvuden är tillverkade av antingen titan eller PEEK-material och bänkpumpar kan leverera flödeshastigheter på upp till 150 ml/min men mottryck på cirka 725 psi vid dessa höga flödeshastigheter. Flödeshastigheterna i FPLC är vanligtvis högre än i HPLC, där mottrycken vanligtvis är lägre.

Kolonnerna skiljer sig också åt liksom kolonnmaterialen och partikelstorlekarna. HPLC-kolonnerna är tillverkade av rostfritt stål. FPLC-kolonnerna är tillverkade av antingen glaskroppar med toppar och bottnar av högpresterande harts eller PEEK.

De flesta HPLC-kolonnerna är tillverkade av kiseldioxidpärlor med små partikelstorlekar som klarar mycket höga mottryck. Vid FPLC används agaros, polymermaterial eller kiseldioxidmaterial. Partikelstorlekarna för FPLC är större och har stora porstorlekar. FPLC-hartserna klarar inte lika bra av mycket höga mottryck på grund av de tidigare nämnda materialen och storlekarna.

HPLC använder vanligtvis rostfritt stål i flödesvägen. I en FPLC-flödesväg undviks rostfritt stål och ersätts med titan, PEEK och andra högpresterande kompositer.

HPLC används för att separera föreningar med liten molekylvikt. FPLC används för att rena stora biomolekyler som proteiner, nukleotider och peptider.

Mjukvaran skiljer sig också mellan de två teknikerna. HPLC-kromatografiprogrammet styr instrumenteringen och analyserar data. FPLC-programvaran styr modulerna samt integrerar insamling av de renade proverna i fraktionssamlaren. Förutom att övervaka UV-absorptionen övervakar FPLC-systemen även pH och konduktivitet.

Prestationerna hos både HPLC och FPLC har förbättrats sedan de introducerades. År 1969 introducerades den första HPLC:n kommersiellt av Waters Corporation. Det första FPLC-systemet utvecklades av Pharmacia 1982. Idag erbjuder fler företag HPLC-lösningar än FPLC-lösningar.