Kollagenas A

Allmän beskrivning

Kollagenas är ett proteas som klyver det trippelhelikala protein som kallas kollagen. Clostridium histolyticum producerar sex typer av kollagenaser nämligen α, β, γ, δ, ε och λ. Dessa kollagenaser är aktiva mot bindväv och visar större reaktivitet mot gelatin än mot kollagen. Kollagenas som erhålls från Clostridium histolyticum har en mycket stark aktivitet, eftersom det smälter kollagen från båda ändarna, vid så låga temperaturer som 4-10 °C.

Specificitet

Kollagenas bryter ned nativt kollagen. Clostripain, trypsinliknande enzymer och neutrala proteaser bryter också ner andra proteiner.
Enzymaktivitet:
Collagenasaktivitet: >0,15U/mg (enligt Wünsch) (+25°C, 4-phenyl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg som substrat)
Kontaminerande enzymaktiviteter: trypsin, clostripain och neutral proteolytisk aktivitet
Collagenas A har ett balanserat förhållande av enzymaktiviteter.

Användning

Kollagenas från C. histolyticum används ofta för uppdelning av många typer av vävnader (t.ex. lunga, hjärta, muskel, ben, fettvävnad, lever, njure, brosk, bröstkörtel, placenta, blodkärl, hjärna, tumörer, navelsträng) och för framställning av encellssuspensioner för upprättande av primära cellodlingssystem. Kollagenas A rekommenderas när avkastning, livskraft och funktionalitet är viktiga.
Clostridiumkollagenas från Roche har använts för att bereda celler från många typer av vävnad, t.ex. hepatocyter, adipocyter, bukspottkörtelns öar, epitelceller, muskelceller, endotelceller osv. Varje parti enzymets lämplighet för sönderdelning av en viss vävnad bör dock bestämmas empiriskt.

Enhetsdefinition

Innehåll
Lyofilizat, osterilt

Enhetsdefinition: Kollagenas från Roche analyseras i Wünsch-enheter (1 μmol produkt som bildas per minut vid +25 °C med Wünsch-substrat).
Frekvent anges kollagenasaktiviteten i Mandl-enheter (1 μmol leucin som frigörs från kollagen på 5 timmar vid +37 °C).
Det finns tyvärr ingen konsekvent omvandlingsfaktor mellan de två aktivitetsenheterna, eftersom Mandl-enheten delvis beror på koncentrationen av kontaminerande proteaser i kollagenaspreparatet, en obestämbar variabel. Ett renare kollagenaspreparat skulle faktiskt ge en lägre specifik aktivitet i Mandl-enheter än ett rått preparat. Clostridium-preparat ger vanligtvis konverteringsfaktorer på ungefär 1:1800 (t.ex. innehåller ett visst parti Clostridium-kollagenas ungefär 0,15 Wünsch U/mg och 250 Mandl U/mg).

Preparationsanvisning

Aktivator: Ca2+
Hämmare:
Hämmare av kollagenas: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercapto-etanol
Kollagenas hämmas inte av serum.
Clostripainhämmare: TLCK
Trypsinhämmare: aprotinin, trypsinhämmare (äggvita, sojabönor), serum
Arbetskoncentration: Förvaringsförhållanden (arbetslösning): -15 till -25 °C
Roche rekommenderar att man rekonstituerar endast den mängd lyofilizat som behövs för omedelbar användning. Den rekonstituerade lösningen kan förvaras vid -15 till -25 °C i upp till en vecka. Undvik upprepad frysning och upptining eftersom aktiviteten minskar efter rekonstituering.

Rekonstitution

Rekonstitution i vilken balanserad saltlösning som helst (t.ex. HBSS)

Övriga anmärkningar

Endast för biovetenskaplig forskning. Inte för användning i diagnostiska förfaranden.

Leveransvillkor kan variera