Karaktärisering av ett DNA-proteinkomplex och capsomerunderenheter från polyomavirus genom behandling med etylenglykol-bis-N,N’-tetraättiksyra och dithiothreitol

Behandling av polyomavirus med etylenglykol-bil-N,N’-tetraättiksyra (EGTA) och dithiothreitol (DTT) vid pH 8.5 resulterade i att virionerna dissocierades i ett DNA-proteinkomplex och enskilda strukturella capsomerunderenheter. Sedimentationsvärdet för DNA-proteinkomplexet i sackarosgradienter var ungefär 48S, och det hade en densitet på 1,45 g/cm3 i CsCl-gradienter i jämvikt. Alkalisk sackarosanalys av DNA:t i detta DNA-proteinkomplex visade att ungefär 75 % av DNA:t utgörs av komponent 1. De proteiner som är associerade med DNA:t separerades genom behandling med antingen NaCl eller det anjoniska tvättmedlet Sarkosyl. VP1 och histonproteinerna VP 4–7 var de viktigaste proteinerna som var associerade med DNA. Behandling av DNA-proteinkomplexet med alkaliskt pH resulterade i ett specifikt avlägsnande av FP1. Elektronmikroskopi av 48S-dna-proteinkomplexet visade att det är en mycket tätt hoprullad struktur som är något större än den intakta virjonen. Behandling av komplexet med antingen NaCl eller pH 10,5-buffert resulterade i förlust av protein och efterföljande lossning av DNA-proteinkomplexet så att DNA kunde visualiseras. De capsomerunderenheter som frigjordes till följd av EGTA-DTT-behandlingen sedimenterade som 18S-, 12S- och 5S-underenheter i sackarosgradienter. Elektroforisk analys av de isolerade capsomererna visade att VP1, VP2 och VP3 fanns i varje art, även om förhållandet mellan proteinerna varierade. Förutom de strukturella proteinerna fann man att histonerna VP 4–7 huvudsakligen var associerade med 5S capsomerunderenheten.