— FRAPcms

FRAP är en fluorescensmikroskopimetod för att studera rörligheten hos fluorescensmärkta molekyler i levande celler. Den används för att analysera molekyldiffusion i cellen, fluiditet i biomembran och proteinbindning.

Princip:

FRAP kan utföras med hjälp av ett modernt konfokalmikroskop. Det krävs fluorescerande märkning av den intressanta molekylen, till exempel med en GFP-märkt antikropp. Ett typiskt FRAP-experiment omfattar tre olika faser. Först mäts den initiala fluorescensen i den intressanta regionen. Därefter fotograferas de fluorescerande molekylerna inom ett utvalt område. Detta görs genom att fokusera laserstrålen på respektive område, vilket leder till intensiv belysning och utplåning av fluoroforerna. Som ett resultat kan ett mörkt område i det annars fluorescerande provet observeras. Slutligen kan fluorescerande molekyler från omgivningen diffundera genom provet och byta ut de fotoblekade molekylerna mot intakta molekyler. Denna fluorescensåterhämtning mäts över tiden.

Då många faktorer kan påverka återhämtningskinetiken måste FRAP-experimenten planeras väl och de resulterande data måste analyseras noggrant. Det är då möjligt att få fram parametrarna för diffusionskoefficienten och molekylens rörlighet med hjälp av matematisk modellering.