Fluorometer

En förenklad utformning av komponenterna i en fluorometer

Typiskt använder fluorometrar en dubbelstråle. Dessa två strålar arbetar tillsammans för att minska det brus som skapas av fluktuationer i strålningseffekten. Den övre strålen passerar genom ett filter eller en monokromator och passerar genom provet. Den nedre strålen passerar genom en dämpare och justeras för att försöka matcha den fluorescerande effekt som avges från provet. Ljuset från provets fluorescens och den nedre, dämpade strålen registreras av separata transduktorer och omvandlas till en elektrisk signal som tolkas av ett datorsystem.

I maskinen är den transduktor som registrerar den fluorescens som skapas av den övre strålen placerad på ett avstånd från provet och i en 90-graders vinkel från den infallande, övre strålen. Maskinen är konstruerad på detta sätt för att minska det ströljus från den övre strålen som kan träffa detektorn. Den optimala vinkeln är 90 grader.Det finns två olika tillvägagångssätt för att hantera valet av infallande ljus som ger upphov till olika typer av fluorometrar. Om filter används för att välja ljusets våglängder kallas maskinen för en fluorometer. Medan en spektrofluorometer vanligtvis använder två monokromatorer kan vissa spektrofluorometrar använda ett filter och en monokromator. Där bredbandsfiltret i detta fall fungerar för att minska ströljus, bland annat från oönskade diffraktionsordningar av diffraktionsgallret i monokromatorn.

Ljuskällor för fluorometrar är ofta beroende av vilken typ av prov som ska testas. Bland de vanligaste ljuskällorna för fluorometrar är lågtryckskvicksilverlampan. Denna ger många excitationsvåglängder, vilket gör den till den mest mångsidiga. Lampan är dock inte en kontinuerlig strålningskälla. Xenonbågslampan används när en kontinuerlig strålningskälla behövs. Båda dessa källor ger ett lämpligt spektrum av ultraviolett ljus som framkallar kemiluminescens. Dessa är bara två av de många möjliga ljuskällorna.

Glas- och kiselkuvetter är ofta de kärl i vilka provet placeras. Man måste vara försiktig så att man inte lämnar fingeravtryck eller andra typer av märken på kuvettens utsida, eftersom detta kan ge upphov till oönskad fluorescens. ”Spektralklassade” lösningsmedel som metanol används ibland för att rengöra kärlets ytor för att minimera dessa problem.