Principiul analizei ELISpot

Analizele ELISpot utilizează tehnica de analiză imunoenzimatică sandwich (ELISA). Fie un anticorp monoclonal sau policlonal specific pentru analitul ales este preacoperit pe o microplăcuță cu suport de PVDF (difluorură de poliviniliden). Celulele stimulate în mod corespunzător se pipetează în godeuri, iar microplaca este plasată într-un incubator umidificat la 37 °C cu CO2 pentru o anumită perioadă de timp. În timpul acestei perioade de incubație, anticorpul imobilizat, în imediata vecinătate a celulelor secretoare, se leagă de analitul secretat. După spălarea celulelor și a substanțelor nelegate, se adaugă în godeuri un anticorp policlonal biotinilat specific pentru analitul ales. După o spălare pentru a îndepărta orice anticorp biotinilat nelegat, se adaugă o alcalin-fosfatază conjugată cu streptavidină. Enzima nelegată se elimină ulterior prin spălare și se adaugă o soluție de substrat (BCIP/NBT). Se formează un precipitat de culoare albastru-negru care apare sub formă de pete la locurile de localizare a citokinei, fiecare pată individuală reprezentând o celulă individuală care secretă analitul. Spoturile pot fi numărate cu un sistem automat de citire ELISpot sau manual, folosind un stereomicroscop.

.