Colagenaza A

Descriere generală

Colagenaza este o protează care scindează proteina triplu-helicoidală numită colagen. Clostridium histolyticum produce șase tipuri de colagenaze, și anume: α, β, γ, δ, ε și λ. Aceste colagenaze sunt active împotriva țesutului conjunctiv și prezintă mai multă reactivitate față de gelatină decât față de colagen. Colageninaza obținută din Clostridium histolyticum are o activitate foarte puternică, deoarece digeră colagenul de la ambele capete, la temperaturi de doar 4-10 °C.

Specificitate

Colagenaza degradează colagenul nativ. Clostripaina, enzimele asemănătoare tripsinei și proteazele neutre degradează și alte proteine.
Activitate enzimatică:
Activitate colagenazică: >0,15U/mg (conform Wünsch) (+25°C, 4-fenil-azobenzil-oxicarbonil-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg ca substrat)
Activități enzimatice contaminante: tripsină, clostripaină și activitate proteolitică neutră
Colageninaza A are un raport echilibrat de activități enzimatice.

Aplicație

Colageninaza din C. histolyticum este utilizată pe scară largă pentru dezagregarea mai multor tipuri de țesuturi (de exemplu, plămân, inimă, mușchi, oase, țesut adipos, ficat, rinichi, cartilaj, glanda mamară, placentă, vase de sânge, creier, tumori, cordon ombilical) și pentru prepararea suspensiilor unicelulare în vederea stabilirii unor sisteme primare de culturi celulare. Colagenaza A este recomandată atunci când randamentul, viabilitatea și funcționalitatea sunt importante.
Colagenaza Clostridium de la Roche a fost utilizată pentru prepararea celulelor din multe tipuri de țesuturi, cum ar fi hepatocite, adipocite, insule pancreatice, celule epiteliale, celule musculare, celule endoteliale etc. Cu toate acestea, este necesar să se determine în mod empiric dacă fiecare lot de enzimă este adecvat pentru distrugerea unui anumit țesut.

Definiția unității

Cuprins
Liofilizat, nesteril

Definiția unității: Colageninaza de la Roche se măsoară în unități Wünsch (1 μmol de produs format pe minut la +25 °C cu substrat Wünsch).
Frecvent, activitățile colagenazei sunt date în unități Mandl (1 μmol leucină eliberată din colagen în 5 ore la +37 °C).
Din păcate, nu există un factor de conversie coerent între cele două unități de activitate, deoarece unitatea Mandl depinde, în parte, de concentrația de proteaze contaminante din preparatul de colagenază, o variabilă indefinibilă. Un preparat de colagenază mai pur ar da de fapt o activitate specifică mai mică în unități Mandl decât un preparat brut. Preparatele de Clostridium oferă de obicei factori de conversie de aproximativ 1:1800 (de exemplu, un anumit lot de colagenază Clostridium conținea aproximativ 0,15 Wünsch U/mg și 250 Mandl U/mg).

Notă de preparare

Activator: Ca2+
Inhibitori:
Inhibitori ai colagenazei: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercapto-etanol
Colageninaza nu este inhibată de ser.
Inhibitori de clostripaină: TLCK
Inhibitori de tripsină: aprotinină, inhibitor de tripsină (albuș de ou, soia), ser
Concentrație de lucru: 0,5 până la 2,5 mg/ml
Condiții de păstrare (soluție de lucru): -15 până la -25 °C
Roche recomandă să se reconstituie doar cantitatea de liofilizat necesară pentru utilizare imediată. Soluția reconstituită poate fi depozitată la o temperatură cuprinsă între -15 și -25 °C timp de până la o săptămână. Evitați congelarea și decongelarea repetată, deoarece activitatea scade după reconstituire.

Reconstituire

Reconstituire în orice soluție salină echilibrată (de exemplu, HBSS)

Alte note

Numai pentru cercetare în domeniul științelor vieții. Nu se utilizează în procedurile de diagnosticare.

Condițiile de expediere pot varia

.