Care sunt diferențele dintre FPLC și HPLC

FPLC înseamnă cromatografie lichidă rapidă a proteinelor, iar HPLC înseamnă cromatografie lichidă de înaltă performanță. Deși ambele tehnici sunt similare, există diferențe semnificative în ceea ce privește metodele lor cromatografice. HPLC este o tehnică analitică utilizată în principal pentru analiza cantitativă și calitativă a probelor lichide. Pe de altă parte, FPLC este o tehnică de purificare care este utilizată pentru a separa amestecuri de proteine și pentru a colecta componentele separate de interes. În timp ce atât HPLC, cât și FPLC utilizează pompe, detectoare, supape și software, FPLC utilizează, de asemenea, monitoare de pH și conductivitate, precum și colectoare de fracții. Un alt mod de a diferenția HPLC de FPLC este că HPLC este considerată o tehnică analitică, în timp ce FPLC este o tehnică pregătitoare.

În HPLC se folosesc mai multe metode pentru separări, cromatografia cu fază inversă fiind cea mai răspândită. HPLC utilizează solvenți pentru faza mobilă, iar FPLC utilizează tampoane de sare pentru faza mobilă. FPLC utilizează mai multe metode de purificare, inclusiv schimbul de ioni, filtrarea pe gel și afinitatea, precum și alte metode mai puțin utilizate. Purificarea FPLC este, de obicei, un proces în mai multe etape care include o combinație de metode.

Capacele pompelor HPLC sunt fabricate din oțel inoxidabil și capacitatea de debit nu depășește, de obicei, 10 ml/min, în timp ce capacitatea de contrapresiune este, de obicei, de 6000 psi și mai mare. Capetele de pompare FPLC sunt realizate fie din materiale din titan, fie din PEEK, iar pompele de banc pot furniza debite de până la 150 ml/min, dar contrapresiuni de aproximativ 725 psi la aceste debite ridicate. Debiturile în FPLC sunt de obicei mai mari decât în HPLC, unde contrapresiunile sunt de obicei mai mici.

Columnele diferă, de asemenea, precum și materialele coloanelor și dimensiunile particulelor. Coloanele HPLC sunt realizate din oțel inoxidabil. Coloanele FPLC sunt realizate fie din corpuri de sticlă cu vârfuri și funduri din rășini de înaltă performanță, fie din PEEK.

Majoritatea rășinilor HPLC sunt realizate din perle de silice cu particule de dimensiuni mici care pot suporta contrapresiuni foarte mari. FPLC utilizează agaroză, materiale polimerice sau materiale de silice. Dimensiunile particulelor pentru FPLC sunt mai mari și au pori de dimensiuni mari. Rășinile FPLC nu sunt la fel de capabile să suporte contrapresiuni foarte mari din cauza materialelor și dimensiunilor menționate anterior.

HPLC utilizează de obicei oțel inoxidabil în calea de curgere. Într-o cale de curgere FPLC, oțelul inoxidabil este evitat și înlocuit cu titan, PEEK și alte materiale compozite de înaltă performanță.

HPLC este utilizat pentru a separa compușii cu greutate moleculară mică. FPLC este utilizată pentru a purifica biomoleculele mari, cum ar fi proteinele, nucleotidele și peptidele.

Software-ul diferă, de asemenea, între cele două tehnici. Software-ul de cromatografie HPLC controlează instrumentația și analizează datele. Software-ul FPLC controlează modulele, precum și integrarea colectării probelor purificate în colectorul de fracții. În plus față de monitorizarea absorbției UV, sistemele FPLC monitorizează, de asemenea, pH-ul și conductivitatea.

Performanțele atât ale HPLC cât și ale FPLC s-au îmbunătățit de la introducerea lor. În 1969, primul HPLC a fost introdus în comerț de Waters Corporation. Primul sistem FPLC a fost dezvoltat de Pharmacia în 1982. Astăzi, mai multe companii oferă soluții HPLC decât soluții FPLC.

.