Caracterizarea unui complex ADN-proteic și a subunităților capsomerelor derivate din virusul polyoma prin tratament cu acid etilenglicol-bis-N,N'-tetraacetic și ditiotreitol – PubMed

Tratarea virionilor de polyoma cu acid etilenglicol-bil-N,N’-tetraacetic (EGTA) și ditiotreitol (DTT) la pH 8.5 a dus la disocierea virionilor într-un complex ADN-proteină și în subunități capsomere structurale individuale. Valoarea de sedimentare a complexului ADN-proteină în gradienți de zaharoză a fost de aproximativ 48S, iar acesta a avut o densitate de 1,45 g/cm3 în gradienți de echilibru CsCl. Analiza alcalină în zaharoză a ADN-ului din acest complex ADN-proteină a demonstrat că aproximativ 75% din ADN este componenta 1. Proteinele asociate cu ADN-ul au fost disociate prin tratament cu NaCl sau cu detergentul anionic Sarkosyl. VP1 și proteinele histonice VP 4–7 au fost principalele proteine asociate cu ADN-ul. Tratarea complexului ADN-proteină cu un pH alcalin a dus la eliminarea specifică a FP1. Microscopia electronică a complexului ADN-proteină 48S a demonstrat că acesta este o structură foarte strâns încolăcită care este puțin mai mare decât virionul intact. Tratarea complexului fie cu NaCl, fie cu un tampon cu pH 10,5 a dus la pierderea proteinei ș i la slăbirea ulterioară a complexului ADN-proteină, astfel încât ADN-ul a putut fi vizualizat. Subunitățile capsomerelor eliberate în urma tratamentului cu EGTA-DTT s-au sedimentat ca subunități 18S, 12S și 5S în gradienți de zaharoză. Analiza electroforetică a capsomerelor izolate a demonstrat că VP1, VP2 și VP3 erau prezente în fiecare specie, deși proporțiile proteinelor variau. În plus față de proteinele structurale, s-a constatat că histonele VP 4-7 sunt asociate în mod predominant cu subunitatea capsomerelor 5S.