Quais são as diferenças entre FPLC e HPLC

FPLC significa cromatografia líquida de proteína rápida e HPLC significa cromatografia líquida de alto desempenho. Embora ambas as técnicas sejam semelhantes, existem diferenças significativas em seus métodos cromatográficos. HPLC é uma técnica analítica utilizada principalmente para análise quantitativa e qualitativa de amostras líquidas. Por outro lado, a HPLC é uma técnica de purificação que é utilizada para separar misturas de proteínas e para recolher os componentes separados de interesse. Enquanto tanto a HPLC como a FPLC utilizam bombas, detectores, válvulas e software, a FPLC também utiliza monitores de pH e condutividade, assim como coletores de fração. Outra maneira de diferenciar HPLC de FPLC é que HPLC é considerada uma técnica analítica enquanto FPLC é uma técnica preparatória.

Em HPLC vários métodos são usados para separações com cromatografia de fase reversa sendo a mais prevalente. HPLC utiliza solventes para a fase móvel e FPLC utiliza tampões salinos para a fase móvel. A FPLC usa vários métodos de purificação incluindo troca iônica, filtração em gel e afinidade, assim como outros métodos menos utilizados. A purificação por FPLC é geralmente um processo de múltiplas etapas incluindo uma combinação de métodos.

Cabeças de bomba por HPLC são feitas de aço inoxidável e a capacidade de vazão geralmente não excede 10 ml/min, enquanto que a capacidade de contrapressão é tipicamente 6000 psi e superior. As cabeças de bomba FPLC são feitas de titânio ou PEEK e as bombas de bancada podem fornecer vazões tão altas quanto 150 mls/min, mas pressões de retorno de aproximadamente 725 psi a essas altas vazões. As taxas de vazão em FPLC são geralmente mais altas que em HPLC, onde as contrapressões são tipicamente mais baixas.

As colunas também diferem assim como os materiais das colunas e os tamanhos das partículas. As colunas para HPLC são feitas de aço inoxidável. As colunas para HPLC são feitas de corpos de vidro com topos e fundos de resina de alto desempenho ou PEEK.

A maioria das resinas HPLC são feitas de contas de sílica com pequenos tamanhos de partículas que podem suportar pressões de retorno muito altas. A FPLC utiliza agarose, materiais poliméricos ou materiais de sílica. Os tamanhos de partículas para FPLC são maiores e têm poros de grandes dimensões. As resinas para FPLC não são tão capazes de lidar com pressões de retorno muito altas devido ao material e tamanhos previamente mencionados.

HPLC normalmente usa aço inoxidável no caminho de fluxo. Em um caminho de fluxo de FPLC, o aço inoxidável é evitado e substituído por titânio, PEEK e outros compostos de alto desempenho.

HPLC é usado para separar compostos de pequeno peso molecular. A FPLC é usada para purificar biomoléculas grandes como proteínas, nucleotídeos e peptídeos.

O software também difere entre as duas técnicas. O software de cromatografia por HPLC controla a instrumentação e analisa os dados. O software FPLC controla os módulos assim como integra a coleta das amostras purificadas no coletor de fração. Além de monitorar a absorção de UV, os sistemas FPLC também monitoram o pH e a condutividade.

O desempenho tanto do HPLC quanto do FPLC tem melhorado desde suas introduções. Em 1969, o primeiro HPLC foi introduzido comercialmente pela Waters Corporation. O primeiro sistema de HPLC foi desenvolvido pela Pharmacia em 1982. Hoje, mais empresas oferecem soluções de HPLC do que soluções de FPLC.