PLOS ONE

Materiais e métodos

Desenho do estudo

Este estudo utilizou um desenho de série temporal de braço único quase experimental.

Participantes e ajuste

Este estudo foi um estudo de viabilidade. O tamanho da amostra foi baseado em pesquisas anteriores sobre o nível OT de saliva de 11 mulheres em aleitamento materno . Estudos anteriores relatando o nível de OT de plasma em mulheres grávidas envolveram cerca de 10 a 20 sujeitos . Os critérios de elegibilidade foram os seguintes: planeado dar à luz um parto cefálico espontâneo; entre 38 e 40 semanas de gestação; asiático e sabe ler e escrever japonês; recebeu permissão do obstetra ou parteira para participar. Os critérios de exclusão foram os seguintes: tomar qualquer medicação relacionada à sua gestação; ter complicações médicas ou de gravidez e doença mental; ter histórico médico de tratamento com Tecnologia Reprodutiva Assistida; IMC pré-gestacional > 25; parto induzido planejado; ter tido gravidez prolongada; ter cesariana prévia; amamentar uma criança. Um fluxograma demonstrando o recrutamento dos participantes do estudo é mostrado na Fig. 1.

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Quando mulheres grávidas elegíveis com 34 semanas de gestação visitaram a ala ambulatorial para um check-up pré-natal, nós explicamos verbalmente nossa pesquisa em um local sem enfermeira ou obstetra. Após a obtenção do consentimento, decidimos com a participante o primeiro dia de intervenção após 38 semanas de gestação. As mulheres também receberam um formulário de recusa nesse momento com uma explicação de que podem se retirar a qualquer momento sem qualquer desvantagem. Nas instalações de coleta de dados deste estudo, o exame pélvico é realizado para todas as mulheres grávidas após as 37 semanas de check-up. A varredura de membranas pode ser realizada a critério de um obstetra após 39 semanas gestacionais.

As experiências foram realizadas no hospital por 3 dias consecutivos. Houve alguns sujeitos que fizeram check-ups perinatais por obstetras antes e depois do experimento. Os dados foram coletados em uma única maternidade em Kanagawa, Japão, entre junho de 2015 e agosto de 2015.

O protocolo de estudo foi aprovado pelo Comitê de Revisão Institucional da Universidade Internacional St. Luke, Tóquio, Japão (No. 15-011). Este estudo foi registrado no Registro de Ensaios Clínicos da Rede de Informação Médica do Hospital Universitário no Japão (UMIN000017911).

Procedimentos

O tempo de intervenção de estimulação mamária foi de 3 dias. O mesmo tempo do dia foi usado para controlar os efeitos diurnos. A saliva foi recolhida no período das 10:00 às 16:00 hrs. Os participantes foram convidados a abster-se de relações sexuais e de beber álcool antes do dia da intervenção. Eles também foram instruídos a terminar a refeição, escovar os dentes e a não fumar 1 hora antes da intervenção. Também lhes foi pedido que não usassem batom. O experimento foi iniciado 30 minutos após a ingestão de 100 ml de água.

No início do estudo, o escore cervical foi avaliado para a maturação cervical (Fig. 2; verificação cervical) usando um Bishop Score modificado. O amadurecimento cervical pode ser uma opção possível para avaliar a intervenção em relação ao ponto final. Os avaliadores foram compostos por 3 parteiras que possuem 10 anos de experiência para padronizar a avaliação.

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Os participantes realizaram a estimulação mamária durante 3 dias juntamente com uma parteira atendente no hospital. Para padronizar a técnica de intervenção, uma parteira demonstrou como realizar a estimulação mamária durante 10 minutos usando um modelo de mama preparado a partir de lã e um instrumento de medição de pressão (Perineometer, OWOMED, Gyeonggido, Coreia do Sul). A pressão de estimulação recomendada estava entre 20 e 50 mmHg, o que é uma pressão suave e não danifica o mamilo. Para alcançar um ritmo de estimulação de 69 batimentos por minuto, foi usado como guia um metrônomo elétrico de iluminação (SQ50V, Seiko Watch Corporation, Tóquio, Japão) sem um som. Cada seio foi estimulado durante 15 minutos, começando pela direita, alternando entre os seios para prevenir a hiperestimulação uterina, durante um total de 1 hora por dia. A estimulação mamária foi realizada apertando a mama a um grau que não doía, desde a aréola externa até ao mamilo, usando o polegar, o indicador e o dedo médio. A auto-estimulação directa da mama foi realizada usando a mão esquerda ou direita com óleo puro de cavalo (Sonbahyu; Yakushido, Fukuoka, Japão). Para responder às preocupações ou preocupações relativas à presença de outros durante a estimulação mamária, foi utilizada uma cobertura de enfermagem. Conseguimos o tempo e notificamos os participantes.

Leituras de Cardiotocografia (CTG) foram obtidas durante a intervenção para registrar a atividade uterina e verificar a freqüência cardíaca fetal. A contração uterina adequada foi definida como tendo pelo menos 3 contrações com duração de 40 segundos cada, ocorrendo em 10 minutos. A freqüência da contração uterina também pode ser uma opção possível para avaliar a intervenção em relação ao desfecho. Os participantes assistiram a um filme preparado (ou seja, visitas de comboio por toda a Europa) para controlar factores externos que podem afectar o ambiente experimental. Após a intervenção, os participantes responderam a um questionário sobre a viabilidade da intervenção experimental. A maturação cervical foi reavaliada ao final da intervenção.

Após a intervenção experimental, todos os participantes receberam uma taxa por transferência bancária para participar do estudo (\3.000 ou cerca de $30).

A intervenção foi realizada por 3 parteiras, constituídas pelo primeiro autor e 2 assistentes de pesquisa. Elas tiveram a capacidade de leitura de CTG adequada, adquirida com seus mais de 5 anos de experiência clínica e mais de 100 casos de condução de trabalho para este estudo de viabilidade. Para a padronização da intervenção, as explicações para os participantes e os detalhes da intervenção foram unificados. Além disso, o primeiro autor participou consistentemente dos experimentos duas vezes no início para garantir que os assistentes da pesquisa pudessem implementar adequadamente o procedimento de intervenção. O assistente de pesquisa A foi responsável por 30,3% dos experimentos, B por 3,0%, e o primeiro autor pelo resto dos experimentos. Além disso, em 40% dos dias em que o assistente de pesquisa A foi responsável pelos experimentos, o primeiro autor esteve no hospital e confirmou a padronização dos experimentos.

Procedimento de coleta da Saliva

Os ensaios salivares são relativamente fáceis de realizar e são minimamente invasivos para mulheres grávidas. Uma correlação moderada (r = 0,41-0,59) tem sido relatada entre o nível OT salivar e o nível OT plasmático . Além disso, uma correlação positiva (r = 0,89) tem sido mostrada entre o VT salivar e o VT plasmático em pacientes sem histórico de vômito auto-induzido na anorexia nervosa .

Amostras de saliva foram coletadas 10 minutos antes e 15, 30, 60, 75, e 90 minutos após a intervenção de estimulação mamária para um total de 18 amostras por participante. Um mililitro de saliva foi coletado por baba passiva não estimulada para a medida do nível de OT pelo ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA; ENZO Life Sciences, NY, EUA). O manual ELISA afirma que os coeficientes de variabilidade intra-ensaio e inter-ensaio são de 12,6% – 13,3% e 11,9% – 20,9%, respectivamente.

Para padronizar o procedimento de coleta de saliva, foi solicitado aos participantes que colocassem sua saliva na boca por 3 minutos. Em seguida, os participantes coletaram cerca de 1,0 ml de sua saliva para cada amostra em um tubo de polipropileno de 1,5 ml (Eppendorf, NY, EUA) utilizando um auxiliar de coleta de saliva (Salimetrics, PA, EUA). Se este volume não pôde ser coletado após 3 minutos, os participantes repetiram o procedimento de coleta de saliva. As amostras coletadas foram imediatamente armazenadas em um freezer (Cryo Porter CS-80C, Scinics Corp., Tóquio, Japão) a -80°C. O nível OT foi ensaiado usando o método de Carter et al. . Para outros processos experimentais, adicionamos 500 KIU/μL aprotinina após o descongelamento para prevenir a degradação proteolítica.

Polimorfismos do receptor de oxitocina

Polimorfismo de um único nucleotídeo receptor foi relatado para reduzir a sensibilidade à OT . Em particular, mulheres com tipos homozigotos GG no gene receptor OT rs53576 reportaram uma transição para trabalho de parto ativo tardio. No presente estudo, amostras de mucosa bucal foram obtidas para a análise de 3 polimorfismos do gene receptor OT (ou seja, rs53576, rs2254298 e rs1042778) por genotipagem usando o ensaio TaqMan SNP (Applied Biosystems, Thermo Fisher, MA, EUA).

Fasibilidade em termos de praticidade e aceitabilidade

Avaliamos a viabilidade do protocolo de intervenção de estimulação mamária em termos de praticidade e aceitabilidade . Para a praticidade do método experimental, foi considerada a proporção de amostras analisáveis e a ocorrência de eventos adversos. Para a aceitabilidade do método experimental, foi considerada a taxa de abandono após a intervenção. A escala visual analógica (EVA), que é uma das mais válidas, confiáveis e freqüentemente utilizadas para uma medida de auto-relato, foi utilizada no presente estudo para avaliar a fadiga e a dor. As mulheres responderam aos seguintes comentários e perguntas usando as seguintes escalas ou: “Por favor, dê o seu feedback em relação à massagem dos seios; 1) Os seus braços e dedos ficaram cansados? 2) Tinha alguma dor no mamilo?” e “Por favor, dê o seu feedback em relação à recolha de saliva; 1) Sentiu fadiga na recolha de saliva?”. Uma escala de 4 níveis da Likert foi usada ao responder as seguintes perguntas: 1) “Foi desconfortável tocar no mamilo?”, 2) “As instruções para o método de estimulação foram fáceis de entender?”, 3) “Você quer fazer este procedimento novamente na sua próxima gravidez?”, e 4) “Você gostaria de fornecer informações sobre esta técnica aos seus amigos?”. Considerando os antecedentes culturais dos asiáticos orientais que tendem a escolher o ponto médio, foi utilizada uma escala de 4 níveis de Likert para a medição da atitude a fim de evitar ambiguidade para estas questões. Por outro lado, para o ritmo e intensidade do estímulo, foi utilizada uma escala Likert de 5 níveis, que inclui “moderadamente” como uma escolha intermediária. Além disso, os participantes responderam a perguntas sobre o ambiente onde a intervenção foi realizada.

Análise de dados

As médias (M), desvios padrão (DP), erros padrão (SE) e medianas de todas as variáveis foram calculadas. Foi utilizado um modelo linear misto utilizando a estrutura de covariância AR (1) com o nível OT como variável dependente e o dia e hora da intervenção como efeitos fixos. Foi realizado o teste MCAR de Little. Além de todos os níveis de OT, idade, semanas gestacionais na intervenção, história obstétrica, estado civil, convivência com o parceiro e educação ≥ 12 anos foram incluídos no procedimento de imputação como fatores que influenciam o nível de OT. O resultado foi p = 0,980, e a hipótese nula não foi rejeitada. A causa principal da falta de dados foi volume insuficiente de saliva e não faltavam dados devido ao valor da OT, assim os dados em falta neste estudo refletiram a falta completamente ao acaso (MCAR). Utilizamos o procedimento de imputação múltipla no SPSS Missing Values para imputar os dados em falta. Foram criados cinco conjuntos de dados imputados. Os dados tinham uma distribuição não-normal. O coeficiente de correlação de Spearman foi usado para testar a correlação entre o nível de OT salivar e o escore ou características cervicais. Análises estatísticas foram realizadas usando o IBM SPSS Statistics (versão 22.0; Static Base and Advanced Statistics, IBM Japão, Tóquio, Japão).