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Digital imaging is increasingly applied to image capture for microscopy – uma área que exige alta resolução, fidelidade de cores e gerenciamento cuidadoso de, muitas vezes, condições de luz limitadas. Estes são requisitos desafiadores, mesmo para a fotografia tradicional baseada em filme, então por que considerar a imagem digital? Este artigo aborda como a imagem digital funciona sob essas condições e quais são as vantagens da imagem digital para o microscopista óptico.

Illustrated in Figure 1 is a digital image of a thick section of mouse intestine stained with three fluorophores and recorded with a Nikon DXM1200 digital camera system coupled to the SMZ1500 stereomicroscope. A imagem foi capturada utilizando uma combinação de fluorescência e as técnicas de iluminação com contraste oblíquo coerente (OCC) patenteadas pela Nikon. Um total de quatro integrações foram realizadas e a imagem foi composta no Photoshop para produzir a versão final apresentada na figura.

Por que considerar a imagem digital?

É importante enfatizar que a qualidade da imagem final, seja digital ou em filme, depende da qualidade da imagem original do microscópio. Não importa quão boa seja a câmera digital ou convencional, ela não pode produzir imagens excepcionais a partir de um microscópio mal configurado. Além disso, tanto o filme quanto os sistemas de imagem digital podem revelar imperfeições que não são imediatamente visíveis ao olhar através da ocular do microscópio.

Com o crescimento geral das comunicações eletrônicas, há uma necessidade real de imagens digitais, que podem ser facilmente transmitidas a um grande número de usuários. As imagens digitais, por exemplo, podem ser simplesmente enviadas por e-mail para consulta e discussão, incorporadas em outros documentos digitais, exportadas para sistemas de análise de imagens ou postadas em um site, uma vez que são fáceis de copiar, armazenar e arquivar. Elas também podem ser facilmente anotadas com software apropriado para inclusão em apresentações ou arquivos. Enquanto as imagens fotográficas podem ser digitalizadas para um computador para produzir imagens digitais – a captura de imagens digitais desde o início poupa tempo e esforço.

As máquinas fotográficas mais digitais são do princípio “point and click” – pouca ou nenhuma experiência fotográfica é necessária. A fotomicrografia tradicional, em contraste, requer algum conhecimento de técnicas fotográficas. Os usuários precisam entender os benefícios e desvantagens dos diferentes tipos de filme fotográfico, devem prestar atenção aos filtros que utilizam e ter algum conhecimento da relação entre as aberturas das lentes, velocidades de obturação, profundidade de campo e, para a fotomicrografia colorida, temperatura da cor. Os resultados podem ser variáveis, especialmente para os novatos, daí a importante prática de “escalonamento” de exposições para imagens críticas, ou seja, tirar pelo menos três fotos separadas para garantir que pelo menos uma das fotos seja bem sucedida. Isto, no entanto, aumenta os custos de filme e processamento. A imagem digital não implica em custos contínuos – não há filme ou taxas de processamento.

A imagem digital é quase instantânea. A maioria das câmaras tem um ecrã LCD que permite a visualização da imagem e as imagens podem ser rapidamente transferidas para um PC. A decisão sobre se a imagem é satisfatória pode ser tomada imediatamente. O filme, por outro lado, precisa ser revelado e processado antes de poder ser visto. Nessa altura, o sujeito pode já não existir, especialmente nos casos em que os microscopistas estão a gravar eventos dinâmicos em células vivas.

O que procurar numa câmara digital

Estão disponíveis câmaras com uma saída digital ou analógica. Para saída analógica existem vários padrões diferentes como PAL, NTSC ou RS-170 e para transmitir os dados também existem diferentes formatos como RGB, S-VHS ou composto. Os sinais analógicos devem ser transformados em sinais digitais usando um agarrador de quadros antes de poderem ser enviados para um computador, enquanto que numa câmara digital o sinal para o computador já está em formato digital. Isto reduz o ruído e obviamente omite a necessidade de um “frame grabber”. Os sinais digitais podem ser transferidos para o computador usando portas seriais ou paralelas (ambas lentas), USB (mais rápido mas disponível em quase todos os computadores modernos), Fire Wire (mais rápido que USB mas não tão difundido) ou através de placas para o barramento PCI (mais rápido, amplamente disponível mas requer instalação de placas).