Fluorómetro

Um desenho simplista dos componentes de um fluorómetro

Tipicamente os fluorómetros utilizam um feixe duplo. Estes dois feixes trabalham em conjunto para diminuir o ruído criado pelas flutuações de energia radiante. O feixe superior é passado por um filtro ou monocromador e passa através da amostra. O feixe inferior é passado através de um atenuador e ajustado para tentar igualar a potência fluorescente emitida pela amostra. A luz da fluorescência da amostra e do feixe atenuado inferior é detectada por transdutores separados e convertida para um sinal elétrico que é interpretado por um sistema de computador.

Com a máquina o transdutor que detecta a fluorescência criada a partir do feixe superior está localizado a uma distância da amostra e a um ângulo de 90 graus do feixe incidente, o feixe superior. A máquina é construída desta forma para diminuir a luz difusa do feixe superior que pode atingir o detector. O ângulo ideal é de 90 graus. Há duas abordagens diferentes para lidar com a seleção da luz incidente que dá lugar a fluorômetros de diferentes tipos. Se forem usados filtros para selecionar comprimentos de onda de luz, a máquina é chamada de fluorômetro. Enquanto um espectrofluorômetro normalmente usa dois monocromadores, alguns espectrofluorômetros podem usar um filtro e um monocromador. Onde, neste caso, o filtro de banda larga atua para reduzir a luz difraída, inclusive de ordens indesejadas de difração da grade de difração no monocromador.

Fontes de luz para fluorômetros são freqüentemente dependentes do tipo de amostra sendo testada. Entre as fontes de luz mais comuns para fluorômetros está a lâmpada de mercúrio de baixa pressão. Isto proporciona muitos comprimentos de onda de excitação, o que a torna a mais versátil. No entanto, esta lâmpada não é uma fonte contínua de radiação. A lâmpada de arco de xenônio é utilizada quando é necessária uma fonte contínua de radiação. Ambas as fontes fornecem um espectro adequado de luz ultravioleta que induz a quimioluminescência. Estas são apenas duas das muitas fontes de luz possíveis.

Cuvetes de vidro e sílica são frequentemente os vasos em que a amostra é colocada. Deve-se ter cuidado para não deixar impressões digitais ou qualquer outro tipo de marca no exterior da cubeta, pois isto pode produzir fluorescência indesejada. Solventes “Spectro grade” como o metanol são às vezes usados para limpar as superfícies dos vasos para minimizar estes problemas.