Collagenase A

Descrição geral

A colagenase é uma protease que cliva a proteína tríplice chamada colagénio. O Clostridium histolyticum produz seis tipos de colagenases: α, β, γ, δ, ε e λ. Estas colagenases são activas contra o tecido conjuntivo e mostram maior reactividade à gelatina do que o colagénio. A colagenase obtida do Clostridium histolyticum tem uma actividade muito forte, pois digere o colagénio de ambas as extremidades, a temperaturas tão baixas como 4-10 °C.

Especificidade

A colagenase degrada o colagénio nativo. Clostripain, enzimas semelhantes à tripsina, e proteases neutras também degradam outras proteínas.
Atividade enzimática:
Atividade colagenase: >0,15U/mg (de acordo com Wünsch) (+25°C, 4-fenil-azobenzil-oxicarbonil-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg como substrato)
Atividade enzimática contaminante: tripsina, clostripa, e atividade proteolítica neutra
A colagenase A tem uma relação equilibrada de atividades enzimáticas.

Aplicação

A colagenase de C. histolyticum é amplamente utilizada para a desagregação de muitos tipos de tecidos (por exemplo, pulmão, coração, músculo, osso, tecido adiposo, fígado, rim, cartilagem, glândula mamária, placenta, vasos sanguíneos, cérebro, tumores, cordão umbilical) e para a preparação de suspensões unicelulares para o estabelecimento de sistemas de cultura primária de células. A colagenase A é recomendada quando a produção, viabilidade e funcionalidade são importantes.
Clostridium colagenase da Roche tem sido usada para preparar células de muitos tipos de tecido, tais como hepatócitos, adipócitos, ilhotas pancreáticas, células epiteliais, células musculares, células endoteliais, etc. No entanto, a adequação de cada lote da enzima para a ruptura de um determinado tecido deve ser determinada empiricamente.

Definição da unidade

Conteúdo
Liofilizado, não estéril

Definição da unidade: A colagenase da Roche é testada em unidades Wünsch (1 μmol de produto formado por minuto a +25 °C com o substrato Wünsch).
Frequentemente, as actividades de colagenase são dadas em unidades Mandl (1 μmol leucina libertada de colagénio em 5 horas a +37 °C).
Felizmente, não existe um factor de conversão consistente entre as duas unidades de actividade, uma vez que a unidade Mandl depende, em parte, da concentração de proteases contaminantes na preparação da colagenase, uma variável indefinível. Uma preparação de colagenase mais pura daria na verdade uma atividade específica menor em unidades Mandl do que uma preparação bruta. As preparações de Clostridium normalmente dão fatores de conversão de aproximadamente 1:1800 (por exemplo, um lote particular de Clostridium colagenase continha aproximadamente 0,15 Wünsch U/mg e 250 Mandl U/mg).

Nota de preparação

Ativador: Ca2+
Inibidores:
Inibidores de colagenase: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercapto-etanol
A colagenase não é inibida pelo soro.
Inibidores de colagenase: TLCK
Inibidores da tripsina: aprotinina, inibidor da tripsina (clara de ovo, soja), soro
Concentração de trabalho: 0,5 a 2,5 mg/ml
Condições de armazenamento (solução de trabalho): -15 a -25 °C
Roche recomenda reconstituir apenas a quantidade de liofilizante necessária para o uso imediato. A solução reconstituída pode ser armazenada a -15 a -25 °C durante até uma semana. Evite o congelamento e descongelamento repetidos, uma vez que a actividade diminui após a reconstituição.

Reconstituição

Reconstituição em qualquer solução salina equilibrada (por exemplo, HBSS)

Outras notas

Apenas para pesquisa em ciências da vida. Não para uso em procedimentos diagnósticos.

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