Caracterização de um complexo DNA-proteína e subunidades capsoméricas derivadas do vírus do polioma pelo tratamento com etilenoglicol-bis-N,Ácido N’-tetraacético e ditiotreitol

Tratamento de viriões polioma com etilenoglicol-bil-N,N’-tetraacético (EGTA) e ditiotreitol (DTT) a pH 8.5 resultou na dissociação dos viriões em um complexo DNA-proteína e subunidades estruturais individuais de capsômeros. O valor de sedimentação do complexo DNA-proteína em gradientes de sacarose foi de aproximadamente 48S, e teve uma densidade de 1,45 g/cm3 em gradientes CsCl de equilíbrio. A análise alcalina da sacarose do DNA dentro deste complexo DNA-proteína demonstrou que aproximadamente 75% do DNA é componente 1. As proteínas associadas ao ADN foram dissociadas pelo tratamento com NaCl ou com o detergente aniónico Sarkosyl. VP1 e as proteínas histone VP 4–7 foram as principais proteínas associadas com o DNA. O tratamento do complexo DNA-proteína com pH alcalino resultou na remoção específica de FP1. A microscopia electrónica do complexo DNA-proteína 48S demonstrou que é uma estrutura enrolada muito apertada que é ligeiramente maior do que o virião intacto. O tratamento do complexo com NaCl ou com tampão de pH 10,5 resultou na perda de proteína e subsequente afrouxamento do complexo DNA-proteína de forma que o DNA poderia ser visualizado. As subunidades capsoméricas liberadas como resultado do tratamento EGTA-DTT sedimentado como 18S, 12S, e 5S em gradientes de sacarose. A análise eletroforética dos capsômeros isolados demonstrou que VP1, VP2, e VP3 estavam presentes em cada espécie, embora as proporções das proteínas variassem. Além das proteínas estruturais, as histonas VP 4–7 foram encontradas predominantemente associadas à subunidade capsômeros 5S.