PLOS ONE

Materiały i metody

Projekt badania

W badaniu zastosowano quasi-eksperymentalny jednoramienny projekt serii czasowych.

Uczestnicy i ustawienie

Badanie to było studium wykonalności. Wielkość próby była oparta na wcześniejszych badaniach dotyczących poziomu OT w ślinie od 11 kobiet karmiących piersią. Poprzednie badania dotyczące poziomu OT w osoczu kobiet w ciąży obejmowały około 10 do 20 osób. Kryteria kwalifikacji były następujące: planowany poród pojedynczy przez spontaniczny poród cefaliczny; między 38 a 40 tygodniem ciąży; Azjatka i potrafi czytać i pisać po japońsku; otrzymała zgodę od położnika lub położnej na udział w badaniu. Kryteria wykluczenia były następujące: przyjmowanie jakichkolwiek leków związanych z ciążą; powikłania medyczne lub ciążowe oraz choroby psychiczne; historia leczenia techniką wspomaganego rozrodu; BMI > 25 przed ciążą; planowany poród indukowany; przedłużająca się ciąża; wcześniejsze cięcie cesarskie; karmienie dziecka piersią. Schemat przebiegu rekrutacji uczestników badania przedstawiono na rycinie 1.

Expand

Kiedy kwalifikujące się ciężarne w 34 tygodniu ciąży zgłaszały się do oddziału ambulatoryjnego na kontrolę prenatalną, w miejscu bez pielęgniarki i położnika ustnie tłumaczyliśmy nasze badania. Po uzyskaniu zgody ustalaliśmy z uczestniczką pierwszy dzień interwencji po 38 tygodniu ciąży. Kobiety otrzymywały wówczas również formularz odmowy wraz z wyjaśnieniem, że w każdej chwili mogą się wycofać bez żadnych niedogodności. W ośrodku, w którym zbierane są dane do tego badania, badanie miednicy wykonywane jest u wszystkich ciężarnych po wizycie kontrolnej w 37 tygodniu. Przecieranie błony płodowej może być wykonane według uznania położnika po 39 tygodniu ciąży.

Doświadczenia odbywały się w szpitalu przez 3 kolejne dni. Niektóre z badanych miały kontrolę okołoporodową przeprowadzoną przez położników przed i po eksperymencie. Dane zostały zebrane w jednym szpitalu położniczym w Kanagawie, Japonia między czerwcem 2015 r. a sierpniem 2015 r.

Protokół badania został zatwierdzony przez Institutional Review Board of St. Luke’s International University, Tokio, Japonia (nr 15-011). Badanie to zostało zarejestrowane w rejestrze badań klinicznych University Hospital Medical Information Network w Japonii (UMIN000017911).

Procedury

Czas interwencji stymulacji piersi wynosił 3 dni. W celu kontroli efektów dobowych stosowano tę samą porę dnia. Ślinę pobierano w godzinach od 10:00 do 16:00. Uczestniczki zostały poproszone o powstrzymanie się od stosunków seksualnych i picia alkoholu przed dniem interwencji. Poinformowano ich także o zakończeniu posiłku, umyciu zębów i niepaleniu papierosów na 1 godzinę przed interwencją. Poproszono ich również o nieużywanie szminki. Eksperyment rozpoczynano 30 minut po spożyciu 100 mL wody.

Na początku badania oceniano wynik szyjki macicy pod kątem dojrzewania szyjki macicy (ryc. 2; kontrola szyjki macicy) za pomocą zmodyfikowanej skali Bishop Score. Dojrzewanie szyjki macicy może być możliwą opcją oceny interwencji w odniesieniu do punktu końcowego. Osoby oceniające składały się z 3 położnych, które mają 10-letnie doświadczenie w celu standaryzacji oceny.

Expand

Uczestniczki wykonywały stymulację piersi przez 3 dni wraz z asystującą położną w szpitalu. Aby ujednolicić technikę interwencji, położna zademonstrowała, jak wykonywać stymulację piersi przez 10 minut przy użyciu modelu piersi przygotowanego z wełny i przyrządu do pomiaru ciśnienia (Perineometer, OWOMED, Gyeonggido, Korea Południowa). Zalecane ciśnienie stymulacji wynosiło od 20 do 50 mmHg, co stanowi łagodny ucisk i nie powoduje uszkodzenia brodawki sutkowej. Aby osiągnąć rytm stymulacji wynoszący 69 uderzeń na minutę, jako wskazówki użyto elektrycznego metronomu świetlnego (SQ50V, Seiko Watch Corporation, Tokio, Japonia) bez dźwięku. Każdą pierś stymulowano przez 15 minut, zaczynając od prawej, naprzemiennie, aby zapobiec hiperstymulacji macicy, w sumie przez 1 godzinę dziennie. Stymulację piersi wykonywano przez uszczypnięcie piersi do stopnia, który nie sprawiał bólu, zaczynając od otoczki zewnętrznej do brodawki sutkowej, używając kciuka, palca wskazującego i środkowego. Bezpośrednią samostymulację piersi wykonywano lewą lub prawą ręką przy użyciu Czystego Oleju Końskiego (Sonbahyu; Yakushido, Fukuoka, Japonia). W celu rozwiania wątpliwości lub obaw związanych z obecnością innych osób podczas stymulacji piersi, stosowano osłonę do karmienia piersią. Zarządzaliśmy czasem i powiadomiliśmy uczestników.

Odczyty kardiotokografii (CTG) uzyskano podczas interwencji w celu zarejestrowania aktywności macicy i sprawdzenia częstości akcji serca płodu. Odpowiednią czynność skurczową macicy zdefiniowano jako co najmniej 3 skurcze trwające 40 sekund każdy, występujące w ciągu 10 minut. Częstość skurczów macicy może być również możliwą opcją oceny interwencji w odniesieniu do punktu końcowego. Uczestniczki oglądały przygotowany film (np. podróż pociągiem przez Europę), aby kontrolować czynniki zewnętrzne, które mogą wpływać na środowisko eksperymentalne. Po zakończeniu interwencji uczestniczki odpowiadały na pytania zawarte w kwestionariuszu dotyczącym wykonalności interwencji eksperymentalnej. Ponownie oceniono dojrzewanie szyjki macicy pod koniec interwencji.

Po interwencji eksperymentalnej wszyscy uczestnicy otrzymali opłatę przelewem bankowym za udział w badaniu (3000 lub około 30 USD).

Interwencja została przeprowadzona przez 3 położne składające się z pierwszego autora i 2 asystentów badawczych. Posiadały one odpowiednią umiejętność odczytu CTG, wynikającą z ich ponad 5-letniego doświadczenia klinicznego i ponad 100 przypadków prowadzenia porodów w ramach tego studium wykonalności. Dla standaryzacji interwencji ujednolicono objaśnienia dla uczestników i szczegóły interwencji. Ponadto, pierwszy autor konsekwentnie uczestniczył w eksperymentach dwa razy na początku, aby upewnić się, że asystenci badawczy mogą prawidłowo wdrożyć procedurę interwencji. Asystent badawczy A był odpowiedzialny za 30,3% eksperymentów, B za 3,0%, a pierwszy autor za resztę eksperymentów. Ponadto w 40% dni, w których asystent badawczy A był odpowiedzialny za eksperymenty, pierwszy autor był w szpitalu i potwierdzał standaryzację eksperymentów.

Procedura zbierania śliny

Atesty ślinowe są stosunkowo łatwe do wykonania i są minimalnie inwazyjne dla kobiet w ciąży. Stwierdzono umiarkowaną korelację (r = 0,41-0,59) pomiędzy poziomem OT w ślinie a poziomem OT w osoczu. Ponadto wykazano pozytywną korelację (r = 0,89) między ślinowym OT a osoczowym OT u pacjentek bez historii samoistnych wymiotów w anorexia nervosa .

Próbki śliny pobierano 10 minut przed i 15, 30, 60, 75 i 90 minut po interwencji stymulacji piersi, w sumie 18 próbek na uczestnika. Jeden mililitr śliny został zebrany przez niestymulowane bierne ślinienie się do pomiaru poziomu OT za pomocą enzymatycznego testu immunosorbcyjnego (ELISA; ENZO Life Sciences, NY, USA). Instrukcja testu ELISA podaje, że współczynniki zmienności wewnątrz- i międzylaboratoryjnej wynoszą odpowiednio 12,6% – 13,3% i 11,9% – 20,9%.

Aby ustandaryzować procedurę zbierania śliny, uczestnicy zostali poproszeni o zebranie śliny w ustach na 3 minuty. Następnie uczestnicy zbierali około 1,0 mL śliny dla każdej próbki do probówki polipropylenowej o pojemności 1,5 mL (Eppendorf, NY, USA) przy użyciu urządzenia wspomagającego zbieranie śliny (Salimetrics, PA, USA). Jeśli nie udało się zebrać takiej ilości śliny po 3 minutach, uczestnicy powtarzali procedurę zbierania śliny. Zebrane próbki były natychmiast przechowywane w zamrażarce (Cryo Porter CS-80C, Scinics Corp., Tokyo, Japonia) w temperaturze -80°C. Poziom OT oznaczano metodą Cartera i wsp. Dla innych procesów eksperymentalnych dodaliśmy 500 KIU/μL aprotyniny po rozmrożeniu, aby zapobiec degradacji proteolitycznej.

Polimorfizmy receptora oksytocyny

Polimorfizm pojedynczego nukleotydu receptora OT został zgłoszony w celu zmniejszenia wrażliwości na OT . W szczególności u kobiet z homozygotycznym typem GG w genie receptora OT rs53576 odnotowano przejście do późnego aktywnego porodu. W obecnym badaniu próbki błony śluzowej policzków uzyskano do analizy 3 polimorfizmów genu receptora OT (tj. rs53576, rs2254298, i rs1042778) poprzez genotypowanie przy użyciu testu TaqMan SNP assay (Applied Biosystems, Thermo Fisher, MA, USA).

Wydajność pod względem praktyczności i akceptowalności

Oceniliśmy wykonalność protokołu interwencji stymulacji piersi pod względem praktyczności i akceptowalności. Przy ocenie praktyczności metody eksperymentalnej wzięto pod uwagę odsetek analizowalnych próbek i występowanie zdarzeń niepożądanych. W celu określenia akceptowalności metody eksperymentalnej wzięto pod uwagę wskaźnik rezygnacji z badania po zakończeniu interwencji. W niniejszym badaniu do oceny zmęczenia i bólu użyto wizualnej skali analogowej (VAS), która jest jednym z najbardziej ważnych, wiarygodnych i często stosowanych narzędzi pomiarowych dla pomiarów typu self-report. Kobiety odpowiadały na następujące komentarze i pytania przy użyciu następujących skal lub: „Proszę wyrazić swoją opinię na temat masażu piersi; 1) Czy Pani ręce i palce były zmęczone? 2) Czy odczuwała Pani ból w sutku?” oraz „Proszę wyrazić swoją opinię na temat pobierania śliny; 1) Czy odczuwała Pani zmęczenie podczas pobierania śliny?”. Przy udzielaniu odpowiedzi na następujące pytania posłużono się 4-stopniową skalą Likerta: 1) „Czy dotykanie brodawki sutkowej było niewygodne?”, 2) „Czy instrukcja dotycząca metody stymulacji była łatwa do zrozumienia?”, 3) „Czy chciałabyś wykonać tę procedurę ponownie w następnej ciąży?”, oraz 4) „Czy chciałabyś przekazać informacje o tej technice swoim znajomym?”. Biorąc pod uwagę tło kulturowe Azjatów Wschodnich, którzy mają tendencję do wybierania punktu środkowego, do pomiaru postawy użyto 4-stopniowej skali Likerta, aby uniknąć niejednoznaczności tych pytań. Z drugiej strony, jeśli chodzi o rytm i intensywność stymulacji, użyto 5-stopniowej skali Likerta, która zawiera „umiarkowanie” jako wybór pośredni. Ponadto uczestnicy odpowiadali na pytania dotyczące środowiska, w którym przeprowadzono interwencję.

Analiza danych

Obliczono średnie (M), odchylenia standardowe (SD), błędy standardowe (SE) i mediany wszystkich zmiennych. Zastosowaliśmy liniowy model mieszany wykorzystujący strukturę kowariancji AR (1) z poziomem OT jako zmienną zależną oraz dniem i czasem interwencji jako efektami stałymi. Przeprowadzono test MCAR Little’a. Oprócz wszystkich poziomów OT, do procedury imputacji włączono wiek, tygodnie ciąży w momencie interwencji, wywiad położniczy, stan cywilny, zamieszkiwanie z partnerem oraz wykształcenie ≥ 12 lat, jako czynniki wpływające na poziom OT. Uzyskano wynik p = 0,980, a hipoteza zerowa nie została odrzucona. Główną przyczyną brakujących danych była niewystarczająca objętość śliny, a nie brak danych wynikający z wartości OT, dlatego brakujące dane w tym badaniu odzwierciedlały brak całkowicie losowy (MCAR). W celu imputacji brakujących danych zastosowaliśmy procedurę wielokrotnej imputacji w SPSS Missing Values. Utworzono pięć imputowanych zestawów danych. Dane miały rozkład nienormalny. Współczynnik korelacji Spearmana został użyty do zbadania korelacji pomiędzy poziomem OT w ślinie a wynikiem lub cechami szyjki macicy. Analizy statystyczne przeprowadzono przy użyciu programu IBM SPSS Statistics (wersja 22.0; Static Base and Advanced Statistics, IBM Japan, Tokyo, Japan).