Kolagenaza A

Opis ogólny

Kolagenaza jest proteazą, która rozszczepia trójpłaszczyznowe białko zwane kolagenem. Clostridium histolyticum wytwarza sześć typów kolagenaz, mianowicie α, β, γ, δ, ε i λ. Kolagenazy te są aktywne wobec tkanki łącznej i wykazują większą reaktywność wobec żelatyny niż kolagenu. Kolagenaza otrzymana z Clostridium histolyticum ma bardzo silną aktywność, ponieważ trawi kolagen z obu końców, w temperaturach tak niskich jak 4-10 °C.

Specyficzność

Kolagenaza degraduje natywny kolagen. Klostrypsyna, enzymy trypsynopodobne i neutralne proteazy również degradują inne białka.
Aktywność enzymu:
Aktywność kolagenazy: >0,15U/mg (wg Wünscha) (+25°C, 4-fenylo-azobenzylo-oksykarbonylo-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg jako substrat)
Aktywność enzymów rozkładających: trypsyna, klostrypsyna i neutralne proteazy
Kolagenaza A ma zrównoważony stosunek aktywności enzymatycznych.

Zastosowanie

Kolagenaza z C. histolyticum jest szeroko stosowana do dezagregacji wielu rodzajów tkanek (np. płuc, serca, mięśni, kości, tkanki tłuszczowej, wątroby, nerek, chrząstek, gruczołu mlekowego, łożyska, naczyń krwionośnych, mózgu, guzów, pępowiny) oraz do przygotowania zawiesin jednokomórkowych w celu utworzenia systemów pierwotnych hodowli komórkowych. Kolagenaza A jest zalecana, gdy ważna jest wydajność, żywotność i funkcjonalność.
KolagenazaClostridium firmy Roche była stosowana do przygotowania komórek z wielu rodzajów tkanek, takich jak hepatocyty, adipocyty, wysepki trzustkowe, komórki nabłonkowe, komórki mięśniowe, komórki śródbłonka itp. Jednakże przydatność każdej partii enzymu do rozbijania określonej tkanki powinna być określona empirycznie.

Definicja jednostki

Zawartość
Liofilizat, niesterylny

Definicja jednostki: Kolagenaza firmy Roche jest oznaczana w jednostkach WĂĽnscha (1 μmol produktu tworzonego w ciągu minuty w temperaturze +25 °C z substratem WĂĽnscha).
Często aktywność kolagenazy jest podawana w jednostkach Mandla (1 μmol leucyny uwolniony z kolagenu w ciągu 5 godzin w temperaturze +37 °C).

Uwaga o preparatyce

Aktywator: Ca2+
Inhibitory:
Inhibitory kolagenazy: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-merkapto-etanol
Kolagenaza nie jest hamowana przez surowicę.
Inhibitory kolagenazy: TLCK
Inhibitory trypsyny: aprotynina, inhibitor trypsyny (białko jaja, soja), surowica
Stężenie robocze: 0,5 do 2,5 mg/ml
Warunki przechowywania (roztwór roboczy): od -15 do -25°C
Roche zaleca rekonstytuowanie tylko takiej ilości liofilizatu, jaka jest potrzebna do natychmiastowego użycia. Odtworzony roztwór może być przechowywany w temperaturze od -15 do -25°C przez okres do jednego tygodnia. Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania, ponieważ aktywność zmniejsza się po rekonstytucji.

Rekonstytucja

Rekonstytucja w dowolnym zrównoważonym roztworze soli (np., HBSS)

Inne uwagi

Wyłącznie do badań z zakresu nauk biologicznych. Nie do stosowania w procedurach diagnostycznych.

Warunki wysyłki mogą się różnić

.