Jakie są różnice między FPLC i HPLC

FPLC oznacza szybką chromatografię cieczową białek, a HPLC oznacza wysokosprawną chromatografię cieczową. Chociaż obie techniki są podobne, istnieją znaczące różnice w ich metodach chromatograficznych. HPLC jest techniką analityczną stosowaną głównie do ilościowej i jakościowej analizy próbek ciekłych. Z drugiej strony, FPLC jest techniką oczyszczania, która jest używana do rozdzielania mieszanin białek i zbierania oddzielonych składników zainteresowania. Podczas gdy zarówno HPLC jak i FPLC wykorzystują pompy, detektory, zawory i oprogramowanie, FPLC wykorzystuje również monitory pH i przewodności oraz kolektory frakcji. Innym sposobem odróżnienia HPLC od FPLC jest to, że HPLC jest uważana za technikę analityczną, podczas gdy FPLC jest techniką przygotowawczą.

W HPLC do rozdzielania stosuje się kilka metod, z których najbardziej rozpowszechniona jest chromatografia fazy odwróconej. HPLC wykorzystuje rozpuszczalniki jako fazę ruchomą, a FPLC wykorzystuje bufory solne jako fazę ruchomą. FPLC wykorzystuje kilka metod oczyszczania, w tym wymianę jonową, filtrację żelową i powinowactwo, jak również inne, rzadziej stosowane metody. Oczyszczanie FPLC jest zwykle procesem wieloetapowym, obejmującym kombinację metod.

Głowice pomp HPLC są wykonane ze stali nierdzewnej, a zdolność przepływu zwykle nie przekracza 10 ml/min, natomiast zdolność ciśnienia wstecznego wynosi zwykle 6000 psi i więcej. Głowice pomp FPLC są wykonane z materiałów tytanowych lub PEEK, a pompy stołowe mogą zapewniać natężenie przepływu do 150 ml/min, ale przy tak wysokim natężeniu przepływu ciśnienie wsteczne wynosi około 725 psi. Natężenia przepływu w FPLC są zazwyczaj wyższe niż w HPLC, gdzie ciśnienia wsteczne są zazwyczaj niższe.

Kolumny różnią się również materiałami kolumn i rozmiarami cząstek. Kolumny HPLC są wykonane ze stali nierdzewnej. Kolumny FPLC są wykonane albo z korpusów szklanych z wysokowydajnymi żywicami górnymi i dolnymi, albo z PEEK.

Większość żywic HPLC jest wykonana z perełek krzemionkowych o małych rozmiarach cząstek, które mogą wytrzymać bardzo wysokie ciśnienia wsteczne. FPLC wykorzystuje agarozę, materiały polimerowe lub materiały krzemionkowe. Rozmiary cząstek dla FPLC są większe i mają duże rozmiary porów. Żywice FPLC nie są tak zdolne do obsługi bardzo wysokich ciśnień wstecznych z powodu wcześniej wymienionych materiałów i rozmiarów.

HPLC zazwyczaj wykorzystuje stal nierdzewną w ścieżce przepływu. W ścieżce przepływu FPLC unika się stali nierdzewnej i zastępuje ją tytanem, PEEK i innymi kompozytami o wysokiej wydajności.

HPLC jest używana do rozdzielania związków o małej masie cząsteczkowej. FPLC jest używana do oczyszczania dużych biomolekuł, takich jak białka, nukleotydy i peptydy.

Oprogramowanie również różni się między tymi dwiema technikami. Oprogramowanie do chromatografii HPLC kontroluje oprzyrządowanie i analizuje dane. Oprogramowanie FPLC kontroluje moduły, jak również integruje zbieranie oczyszczonych próbek do kolektora frakcji. Oprócz monitorowania absorpcji UV, systemy FPLC monitorują również pH i przewodność.

Wydajność zarówno HPLC, jak i FPLC poprawiła się od czasu ich wprowadzenia. W 1969 roku pierwszy system HPLC został wprowadzony na rynek przez firmę Waters Corporation. Pierwszy system FPLC został opracowany przez firmę Pharmacia w 1982 roku. Obecnie więcej firm oferuje rozwiązania HPLC niż FPLC.