Fluorometr
Typowo fluorometry wykorzystują podwójną wiązkę. Te dwie wiązki pracują w tandemie, aby zmniejszyć szum powstający w wyniku fluktuacji mocy promieniowania. Górna wiązka jest przepuszczana przez filtr lub monochromator i przechodzi przez próbkę. Dolna wiązka jest przepuszczana przez tłumik i regulowana tak, aby dopasować moc fluorescencji wydzielanej przez próbkę. Światło fluorescencji próbki i dolnej, tłumionej wiązki jest wykrywane przez oddzielne przetworniki i przekształcane w sygnał elektryczny, który jest interpretowany przez system komputerowy.
Wewnątrz maszyny przetwornik wykrywający fluorescencję wytworzoną przez górną wiązkę jest umieszczony w pewnej odległości od próbki i pod kątem 90 stopni od padającej, górnej wiązki. Urządzenie jest tak skonstruowane, aby zmniejszyć ilość światła błądzącego z górnej wiązki, które może uderzyć w detektor. Optymalny kąt to 90 stopni. Istnieją dwa różne podejścia do selekcji światła padającego, co daje różne typy fluorometrów. Jeśli do selekcji długości fal świetlnych używane są filtry, urządzenie nazywane jest fluorometrem. Podczas gdy spektrofluorometr zazwyczaj używa dwóch monochromatorów, niektóre spektrofluorometry mogą używać jednego filtra i jednego monochromatora. Gdzie, w tym przypadku, filtr szerokopasmowy działa w celu zmniejszenia światła błądzącego, w tym od niepożądanych zleceń dyfrakcji siatki dyfrakcyjnej w monochromatorze.
Źródła światła dla fluorometrów są często zależne od rodzaju badanej próbki. Do najczęstszych źródeł światła dla fluorometrów należy niskociśnieniowa lampa rtęciowa. Zapewnia ona wiele długości fal wzbudzenia, co czyni ją najbardziej uniwersalną. Jednak lampa ta nie jest ciągłym źródłem promieniowania. Ksenonowa lampa łukowa jest używana, gdy potrzebne jest ciągłe źródło promieniowania. Oba te źródła zapewniają odpowiednie spektrum światła ultrafioletowego, które indukuje chemiluminescencję. Są to tylko dwa z wielu możliwych źródeł światła.
Kuwety szklane i krzemionkowe są często naczyniami, w których umieszcza się próbkę. Należy uważać, aby nie pozostawić odcisków palców lub innego rodzaju śladów na zewnętrznej stronie kuwety, ponieważ może to wywołać niepożądaną fluorescencję. „Spectro grade” rozpuszczalniki takie jak metanol są czasami używane do czyszczenia powierzchni naczyń, aby zminimalizować te problemy.
Leave a Reply