Characterization of a DNA-protein complex and capsomere subunits derived from polyoma virus by treatment with ethyleneglycol-bis-N,N’-tetraoctowym i dithiothreitolem

Traktowanie wirusów polyoma kwasem etyleneglikol-bil-N,N’-tetraoctowym (EGTA) i dithiothreitolem (DTT) w pH 8.5 spowodowało rozpad wirionów na kompleks DNA-białko i pojedyncze podjednostki strukturalne kapsomerów. Wartość sedymentacji kompleksu DNA-białko w gradientach sacharozy wynosiła około 48S, a jego gęstość w gradientach równowagowych CsCl wynosiła 1,45 g/cm3. Analiza sacharozy alkalicznej DNA w obrębie tego kompleksu DNA-białko wykazała, że około 75% DNA stanowi składnik 1. Białka związane z DNA zostały zdysocjowane przez traktowanie albo NaCl albo anionowym detergentem Sarkosyl. VP1 i białka histonowe VP 4–7 były głównymi białkami związanymi z DNA. Traktowanie kompleksu DNA-białko alkalicznym pH powodowało specyficzne usunięcie FP1. Mikroskopia elektronowa kompleksu DNA-białko 48S wykazała, że jest to bardzo ciasno zwinięta struktura, która jest nieco większa niż nienaruszony wirion. Poddanie kompleksu działaniu NaCl lub buforu o pH 10,5 powodowało utratę białka, a następnie rozluźnienie kompleksu DNA-białko, co umożliwiało uwidocznienie DNA. Podjednostki kapsomerów uwolnione w wyniku działania EGTA-DTT sedymentowały jako podjednostki 18S, 12S i 5S w gradientach sacharozy. Analiza elektroforetyczna wyizolowanych kapsomerów wykazała, że VP1, VP2 i VP3 były obecne u każdego gatunku, chociaż proporcje tych białek były różne. Oprócz białek strukturalnych, stwierdzono, że histony VP 4–7 są głównie związane z podjednostką 5S kapsomerów.