Karakterisering van een DNA-eiwitcomplex en capsomere subeenheden afkomstig van polyoma-virus door behandeling met ethyleenglycol-bis-N,N’-tetraazijnzuur en dithiothreitol

Behandeling van polyoma virionen met ethyleenglycol-bis-N,N’-tetraazijnzuur (EGTA) en dithiothreitol (DTT) bij pH 8.5 resulteerde in de dissociatie van de virionen in een DNA-eiwit complex en individuele structurele capsomeer subeenheden. De sedimentatiewaarde van het DNA-eiwitcomplex in sacharosegradiënten was ongeveer 48S, en het had een dichtheid van 1,45 g/cm3 in evenwichts CsCl-gradiënten. Alkalische sucrose-analyse van het DNA binnen dit DNA-eiwitcomplex toonde aan dat ongeveer 75% van het DNA component 1 is. De met het DNA geassocieerde eiwitten werden losgekoppeld door behandeling met NaCl of het anionische detergens Sarkosyl. VP1 en de histon-eiwitten VP 4-7 waren de voornaamste eiwitten die met het DNA geassocieerd waren. Behandeling van het DNA-eiwitcomplex met alkalische pH resulteerde in de specifieke verwijdering van VP1. Elektronenmicroscopie van het 48S DNA-eiwitcomplex toonde aan dat het een zeer strak opgerolde structuur is die iets groter is dan het intacte virion. Behandeling van het complex met NaCl of met pH 10,5 buffer resulteerde in het verlies van eiwit en het loskomen van het DNA-eiwit complex, zodat het DNA zichtbaar werd. De capsomeer subeenheden die vrijkwamen als gevolg van de EGTA-DTT behandeling sedimenteerden als 18S, 12S, en 5S subeenheden in sucrose gradiënten. Elektroforetische analyse van de geïsoleerde capsomeren toonde aan dat VP1, VP2, en VP3 aanwezig waren in elke soort, hoewel de verhoudingen van de eiwitten varieerden. Naast de structurele eiwitten bleken histonen VP 4-7 voornamelijk geassocieerd te zijn met de 5S capsomeer-subeenheid.