Fluorometer

Een simplistisch ontwerp van de onderdelen van een fluorometer

Typisch maken fluorometers gebruik van een dubbele bundel. Deze twee bundels werken samen om de ruis te verminderen die door fluctuaties van het stralingsvermogen wordt veroorzaakt. De bovenste bundel wordt door een filter of monochromator geleid en passeert het monster. De onderste bundel wordt door een verzwakker geleid en aangepast aan het fluorescentievermogen dat door het monster wordt afgegeven. Het licht van de fluorescentie van het monster en de onderste, verzwakte bundel worden gedetecteerd door afzonderlijke transducers en omgezet in een elektrisch signaal dat door een computersysteem wordt geïnterpreteerd.

In de machine bevindt de transducer die de fluorescentie van de bovenste bundel detecteert, zich op enige afstand van het monster en in een hoek van 90 graden ten opzichte van de invallende, bovenste bundel. De machine is zo geconstrueerd om het strooilicht van de bovenbundel dat de detector kan treffen, te verminderen. De optimale hoek is 90 graden.Er zijn twee verschillende benaderingen voor de behandeling van de selectie van invallend licht die aanleiding geeft tot verschillende typen fluorometers. Indien filters worden gebruikt om de golflengten van het licht te selecteren, wordt het apparaat een fluorometer genoemd. Terwijl een spectrofluorometer gewoonlijk twee monochromatoren gebruikt, kunnen sommige spectrofluorometers gebruik maken van één filter en één monochromator. In dit geval fungeert het breedbandfilter om strooilicht te verminderen, onder meer van ongewenste diffractierasters van het diffractierooster in de monochromator.

Lichtbronnen voor fluorometers zijn vaak afhankelijk van het type monster dat wordt getest. Een van de meest voorkomende lichtbronnen voor fluorometers is de lagedrukkwiklamp. Deze levert vele excitatiegolflengten en is daardoor het meest veelzijdig. Deze lamp is echter geen continue stralingsbron. De xenonbooglamp wordt gebruikt wanneer een continue stralingsbron nodig is. Beide bronnen leveren een geschikt spectrum van ultraviolet licht dat chemiluminescentie induceert. Dit zijn slechts twee van de vele mogelijke lichtbronnen.

Glas en siliciumdioxide cuvetten zijn vaak de vaten waarin het monster wordt geplaatst. Er moet voor worden gezorgd dat er geen vingerafdrukken of andere markeringen op de buitenkant van de cuvette achterblijven, omdat dit ongewenste fluorescentie kan veroorzaken. “Spectro-grade” oplosmiddelen zoals methanol worden soms gebruikt om de oppervlakken van de vaten te reinigen om deze problemen te minimaliseren.