Collagenase A

Algemene beschrijving

Collagenase is een protease dat het drievoudig-helische eiwit genaamd collageen splitst. Clostridium histolyticum produceert zes typen collagenasen, namelijk α, β, γ, δ, ε en λ. Deze collagenasen zijn actief tegen bindweefsel en vertonen meer reactiviteit tegen gelatine dan tegen collageen. Collagenase verkregen uit Clostridium histolyticum heeft een zeer sterke activiteit, aangezien het collageen aan beide uiteinden verteert, bij temperaturen zo laag als 4-10 °C.

Specificiteit

Collagenase breekt natief collageen af. Clostripain, trypsine-achtige enzymen, en neutrale proteasen breken ook andere eiwitten af.
Enzymactiviteit:
Collagenase-activiteit: >0,15U/mg (volgens Wünsch) (+25°C, 4-phenyl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg als substraat)
Belastende enzymactiviteiten: trypsine, clostripain, en neutrale proteolytische activiteit
Collagenase A heeft een evenwichtige verhouding van enzymactiviteiten.

Toepassing

Collagenase van C. histolyticum wordt veel gebruikt voor de ontleding van vele soorten weefsels (b.v. long, hart, spier, bot, vetweefsel, lever, nier, kraakbeen, borstklier, placenta, bloedvaten, hersenen, tumoren, navelstreng) en voor de bereiding van suspensies van één cel voor het opzetten van primaire celkweeksystemen. Collagenase A wordt aanbevolen wanneer opbrengst, levensvatbaarheid en functionaliteit belangrijk zijn.
Clostridium collagenase van Roche is gebruikt voor de bereiding van cellen uit vele soorten weefsel, zoals hepatocyten, adipocyten, pancreaseilandjes, epitheelcellen, spiercellen, endotheelcellen, enz. De geschiktheid van elke partij van het enzym voor de disruptie van een bepaald weefsel moet echter empirisch worden bepaald.

Eenheidsdefinitie

Inhoud
Lyofilizaat, niet steriel

Eenheidsdefinitie: Collagenase van Roche wordt gemeten in Wünsch-eenheden (1 μmol product gevormd per minuut bij +25 °C met Wünsch-substraat).
Vaak worden collagenase-activiteiten gegeven in Mandl-eenheden (1 μmol leucine vrijgemaakt uit collageen in 5 uur bij +37 °C).
Helaas is er geen consistente conversiefactor tussen de twee eenheden van activiteit, aangezien de Mandl-eenheid gedeeltelijk afhangt van de concentratie van verontreinigende proteasen in het collagenasepreparaat, een ondefinieerbare variabele. Een zuiverder collagenasepreparaat zou in feite een lagere specifieke activiteit in Mandl-eenheden geven dan een ruw preparaat. Clostridium-preparaten geven gewoonlijk omrekeningsfactoren van ongeveer 1:1800 (b.v. een bepaalde partij Clostridium-collagenase bevatte ongeveer 0,15 Wünsch U/mg en 250 Mandl U/mg).

Preparatienoot

Activator: Ca2+
Remmers:
Collagenase-remmers: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercapto-ethanol
Collagenase wordt niet geremd door serum.
Clostripain remmers: TLCK
Trypsine remmers: aprotinine, trypsine inhibitor (eiwit, soja), serum
Werkconcentratie: 0,5 tot 2,5 mg/ml
Opslagcondities (werkoplossing): -15 tot -25 °C
Roche raadt aan slechts de benodigde hoeveelheid lyofilizaat te reconstitueren voor onmiddellijk gebruik. De gereconstitueerde oplossing kan maximaal een week bij -15 tot -25 °C worden bewaard. Vermijd herhaald invriezen en ontdooien aangezien de activiteit afneemt na reconstitutie.

Reconstitutie

Reconstitutie in elke gebalanceerde zoutoplossing (bijv. HBSS)

Overige opmerkingen

Uitsluitend voor biowetenschappelijk onderzoek. Niet voor gebruik in diagnostische procedures.

Verzendingsvoorwaarden kunnen variëren