ELISpot Assay Principle

ELISpot assayはサンドイッチ酵素免疫吸着測定法（ELISA法）を採用しています。 分析対象物に特異的なモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体をPVDF（ポリフッ化ビニリデン）背面のマイクロプレートにプレコートする。 適切な刺激を受けた細胞をウェルにピペッティングし、マイクロプレートを加湿された37℃のCO2インキュベーターに一定時間置く。 このインキュベーション期間中、分泌細胞のすぐ近くにある固定化抗体は、分泌された分析物を結合する。 細胞や結合していない物質を洗浄した後、選択した分析対象物に特異的なビオチン化ポリクローナル抗体をウェルに添加する。 洗浄後、結合していないビオチン化抗体を除去し、ストレプトアビジンを結合したアルカリホスファターゼを添加する。 その後、結合していない酵素を洗浄で除去し、基質溶液（BCIP/NBT）を添加する。 青黒色の沈殿が形成され、サイトカイン局在部位にスポットとして現れる。個々のスポットは、個々の分析対象物分泌細胞を表す。 ELISpotリーダーを使用し、スポット数をカウントすることができます。