Collagenase A

一般名

Collagenase は、コラーゲンという三重らせん状のタンパク質を切断するプロテアーゼであり、その作用機序は以下の通り。 Clostridium histolyticumはα、β、γ、δ、ε、λの6種類のコラゲナーゼを生産し、結合組織に対して活性を示し、コラーゲンよりもゼラチンに反応性を示すとされている。 Clostridium histolyticumから得られるコラゲナーゼは、4〜10℃という低い温度でコラーゲンを両端から消化するため、非常に強い活性を持っている。

特異性

コラゲナーゼは、ネイティブなコラーゲンを分解する。 クロストライパン、トリプシン様酵素、中性プロテアーゼも他のタンパク質を分解する。
酵素活性：
コラゲナーゼ活性。 >0.15U/mg (Wünschによる) (+25℃、基質として4-phenyl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg)
汚染酵素活性：トリプシン、クロストライン、中性タンパク質分解活性
Collagenase Aは酵素活性の比率が釣り合っている。

Application

C. histolyticum由来のコラゲナーゼは、多くの種類の組織（例えば、肺、心臓、筋肉、骨、脂肪組織、肝臓、腎臓、軟骨、乳腺、胎盤、血管、脳、腫瘍、臍帯）の解離や初代細胞培養系確立のための単細胞懸濁液の調製のために広く使用されています。 収量、生存率、機能性が重要な場合には、コラゲナーゼAをお勧めします。
ロシュ社のClostridium collagenaseは、肝細胞、脂肪細胞、膵島、上皮細胞、筋肉細胞、内皮細胞など多くの種類の組織からの細胞の調製に使用されています。 ただし、特定の組織の破壊に対する本酵素の各ロットの適合性は、経験的に決定されるべきものである。

Unit Definition

Contents
Lyophilizate, nonsterile

Unit Definition.の項参照。 ロシュ社のコラゲナーゼは、Wünsch単位（Wünsch基質で25℃、1分間に1μmolの生成物を生成）で測定されます。
しばしば、コラゲナーゼ活性はMandl単位（37℃、5時間でコラーゲンから1μmolロイシンを遊離させる）で与えられます。
残念ながら、Mandl単位はコラゲナーゼ調製物中の汚染プロテアーゼの濃度に依存するため、2つの活性単位の間に一貫した変換係数は存在しない。 純度の高いコラゲナーゼは、粗製コラゲナーゼよりも比活性が低く、Mandl単位で表示されます。 クロストリジウム製剤は通常、約1:1800の変換係数を与える（例えば、特定のロットのクロストリジウムコラゲナーゼは約0.15 Wünsch U/mgと250 Mandl U/mgを含んでいる）。

Preparation Note

Activator: Ca2+
阻害剤：
コラゲナーゼ阻害剤。 EDTA、EGTA、Cys、His、DTT、2-mercapto-ethanol
Collagenaseは血清で阻害されない
Clostripain inhibitors.EDTA、EGTA、Cys、His、DTT、2-mercapto-ethanol
Collagenaseの阻害剤。 TLCK
トリプシン阻害剤：アプロチニン、トリプシン阻害剤（卵白、大豆）、血清
作業濃度。 0.5～2.5 mg/ml
保存条件（作業液）：-15～-25℃
ロシュ社では、すぐに使用するために必要な量だけ凍結乾燥剤を再構成することを推奨しています。 再構成された溶液は、-15～-25℃で1週間まで保存可能です。 再構成後は活性が低下するため、凍結融解を繰り返さないようにしてください。

再構成

任意のバランス塩溶液（例：HBSS）で再構成

その他の注意

生命科学研究用のみである。 診断には使用できません。

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