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ゲルろ過クロマトグラフィー

ゲルろ過クロマトグラフィー応用例

サイズ排除クロマトグラフィーの一種であるゲルろ過クロマトグラフィーは、サンプル中の分子や複合体を特定のサイズ範囲のフラクションに分画するか、サンプルから特定のサイズより大きな分子をすべて除去するか、あるいは両方の操作を組み合わせて使用することが可能である。 ゲルろ過クロマトグラフィーは、水溶液中の低分子、タンパク質、タンパク質複合体、多糖類、核酸などの化合物を分離するために使用されます。 有機溶媒を移動相として用いる場合は、ゲル浸透クロマトグラフィーと呼ばれる。

ゲルろ過クロマトグラフィーは、次のような用途にも使用されます。

  • 所定のサイズ範囲内の分子および複合体の分画
  • サイズ分析および決定
  • 大きなタンパク質および複合体の除去
  • バッファ交換
  • 脱塩
  • ヌクレオチド、プライマー、色素などの小さな分子の除去 ゲルろ過クロマトグラフィー

    • ゲルろ過クロマトグラフィー

      ゲルを用いての分子間相互作用 。

    • 試料の純度評価
    • 結合した放射性同位元素と結合していない放射性同位元素の分離

    上記のすべての用途のゲルろ過クロマトグラフィー媒体は、プレパックグラビティフローカラム、スピンカラム、低圧および中圧クロマトグラフィーカラム、瓶詰樹脂が入手可能です。

    ゲルろ過クロマトグラフィーの仕組み

    ゲルろ過クロマトグラフィーカラムでは、固定相は多孔質のマトリックスで構成され、移動相はマトリックスビーズの間を流れる緩衝液となる。 ビーズには分画範囲と呼ばれる細孔径の範囲が定義されています。 細孔に入りきらない大きさの分子や複合体は移動相に留まり、バッファーの流れとともにカラム内を移動します。 中圧ゲルろ過クロマトグラフィーシステム

    特定のゲルろ過クロマトグラフィーカラムの分画範囲を超えている分子または複合体は、固定相に入ることができる分子よりも速くカラムを移動します。 したがって、サンプル中の分画範囲以上の成分は、分画範囲内の成分よりも先に（ボイドボリュームで）溶出することになります。 移動相に残り、固定相に入らない最小のサイズを排除限界と呼びます。 バイオ・ラッドでは、100ダルトンから100,000ダルトン（100kDa）まで3桁以上の排除限界のゲルろ過クロマトグラフィー用メディアとカラムを提供しています。

    固定相に入る分子と複合体は、そのサイズに応じて分画されます。 小さな分子は孔の奥深くまで移動し、孔に入りにくい大きな分子よりも遅延されるため、より早くカラムから溶出される。

    脱塩、緩衝液交換、ヌクレオチドなどの低分子除去用に設計されたゲルろ過クロマトグラフィーカラムでは、塩や小さな化合物は孔に入りやすく、大きなタンパク質や核酸よりも遅くカラムを移動する。 そのため、サンプル中の目的成分は塩類やヌクレオチドなどよりも先に溶出される。

    分解能とは、サイズフラクション間の境界の鋭さのことで、ビーズサイズやその他多くの要因によって決定されます。 一般に、ゲルろ過クロマトグラフィーカラムでは、ビーズサイズが小さいほど高い分離能が得られる。 コンパクトな分子は、直線的な分子よりも速く固定相を通過して拡散します。 サイズ排除、分画範囲、溶出速度は、バッファーの組成、イオン強度、pHに影響されます。

    Gel Filtration Chromatography Media

    ゲルろ過クロマトグラフィー用メディアの重要な基準は、メディアが不活性であること、サンプルまたはバッファーのいずれもがメディアに結合することがないことです。 また、使用するゲルろ過カラムの種類、加圧クロマトグラフィーシステムで使用するか、グラビティフローまたはスピンカラムで使用するかということも考慮しなければなりません。

    ゲルろ過クロマトグラフィーの一般的な媒体は、アガロースまたはポリアクリルアミドビーズ、重力または低圧システム用のデキストロース、中圧システム用のポリマー樹脂をベースにしています。 媒体の選択は、分離する成分の特性やその他の実験的要因に依存します。 ゲルろ過クロマトグラフィーの媒体の選択を決定する際に考慮すべき一般的な事項を以下に示します。

    • 分画範囲
    • サイズ排除限界
    • 操作圧力
    • フローレート
    • サンプル粘度
    • pH範囲
    • オートクレーブ耐性
    • 水と混ざりやすい有機溶媒に対する許容範囲
    • 水と混ざりにくい有機溶媒。 水-有機混合溶媒に溶解しやすい試料もあります。
    • 洗浄剤、カオトロピック剤、ホルムアミド等に対する耐性。
    • 操作温度

    試料の種類、媒体の選択、クロマトグラフィーシステムの設定により、精製アプリケーションにとって最も重要なパラメータが決まります。

    クロマトグラフィーシステム。 カラムとメディア

    • クロマトグラフィーカラム
    • 中圧クロマトグラフィーカラム
    • グラビティおよびスピンクロマトグラフィーカラム
    • 低圧クロマトグラフィーカラム
    • 中圧クロマトグラフィーカラム

      • 中圧カラム低圧グラビティおよびスピンクロスプリング

    • 低圧クロマトグラフィーカラム
    • 中圧カラム
    • 中圧クロマトグラフィーカラム
    • クロマトグラフィー媒体
    • サイズ排除クロマトグラフィー媒体
    • クロマトグラフィー媒体サンプルパック
    • クロマトグラフィー標準試料

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