Quali sono le differenze tra FPLC e HPLC

FPLC sta per fast protein liquid chromatography e HPLC sta per high performance liquid chromatography. Mentre entrambe le tecniche sono simili, ci sono differenze significative nei loro metodi cromatografici. HPLC è una tecnica analitica usata principalmente per l’analisi quantitativa e qualitativa di campioni liquidi. D’altra parte, la FPLC è una tecnica di purificazione che viene utilizzata per separare miscele di proteine e per raccogliere i componenti separati di interesse. Mentre sia l’HPLC che l’FPLC utilizzano pompe, rivelatori, valvole e software, l’FPLC utilizza anche monitor di pH e conducibilità, nonché collettori di frazioni. Un altro modo per differenziare l’HPLC dal FPLC è che l’HPLC è considerato una tecnica analitica mentre il FPLC è una tecnica preparativa.

Nell’HPLC vengono utilizzati diversi metodi per le separazioni con la cromatografia a fase inversa che è la più prevalente. L’HPLC utilizza solventi per la fase mobile e la FPLC utilizza tamponi salini per la fase mobile. La FPLC utilizza diversi metodi di purificazione tra cui lo scambio ionico, la filtrazione su gel e l’affinità, nonché altri metodi meno utilizzati. La purificazione FPLC è di solito un processo a più fasi che include una combinazione di metodi.

Le teste delle pompe HPLC sono fatte di acciaio inossidabile e la capacità di portata di solito non supera i 10 ml/min, mentre la capacità di pressione posteriore è tipicamente 6000 psi e superiore. Le teste delle pompe FPLC sono realizzate in titanio o in materiali PEEK e le pompe da banco possono fornire portate fino a 150 ml/min ma pressioni di ritorno di circa 725 psi a queste alte portate. Le portate in FPLC sono di solito più alte rispetto all’HPLC, dove le contropressioni sono tipicamente più basse.

Le colonne differiscono anche come i materiali della colonna e le dimensioni delle particelle. Le colonne HPLC sono fatte di acciaio inossidabile. Le colonne FPLC sono costituite da corpi in vetro con top e fondo in resina ad alte prestazioni o in PEEK.

La maggior parte delle resine HPLC sono costituite da perle di silice con particelle di piccole dimensioni che possono sopportare pressioni posteriori molto elevate. FPLC usa agarosio, materiali polimerici o materiali di silice. Le dimensioni delle particelle per FPLC sono più grandi e hanno grandi pori. Le resine FPLC non sono in grado di gestire pressioni di ritorno molto elevate a causa del materiale e delle dimensioni precedentemente menzionate.

HPLC utilizza tipicamente acciaio inossidabile nel percorso del flusso. In un percorso di flusso FPLC, l’acciaio inossidabile viene evitato e sostituito con titanio, PEEK e altri compositi ad alte prestazioni.

HPLC è usato per separare piccoli composti di peso molecolare. La FPLC è usata per purificare grandi biomolecole come proteine, nucleotidi e peptidi.

Anche il software differisce tra le due tecniche. Il software di cromatografia HPLC controlla la strumentazione e analizza i dati. Il software FPLC controlla i moduli e integra la raccolta dei campioni purificati nel raccoglitore di frazioni. Oltre a monitorare l’assorbimento UV, i sistemi FPLC monitorano anche il pH e la conducibilità.

Le prestazioni di entrambi HPLC e FPLC sono migliorate dalla loro introduzione. Nel 1969, il primo HPLC è stato introdotto commercialmente da Waters Corporation. Il primo sistema FPLC è stato sviluppato da Pharmacia nel 1982. Oggi, più aziende offrono soluzioni HPLC che soluzioni FPLC.