— FRAPcms

FRAP è un metodo di microscopia a fluorescenza per studiare la mobilità delle molecole marcate con fluorescenza nelle cellule viventi. Viene applicato per l’analisi della diffusione delle molecole all’interno della cellula, la fluidità delle bio membrane e il legame delle proteine.

Principio:

FRAP può essere condotto utilizzando un moderno microscopio confocale. Ha bisogno di un’etichettatura fluorescente della molecola di interesse, per esempio da un anticorpo legato alla GFP. Un tipico esperimento FRAP comporta tre fasi distinte. In primo luogo, la fluorescenza iniziale viene misurata nella regione di interesse. Successivamente, le molecole fluorescenti vengono fotosubite all’interno di un’area selezionata. Questo viene fatto focalizzando il raggio laser sulla rispettiva area, portando ad un’intensa illuminazione ed estinzione dei fluorofori. Come risultato, si può osservare un’area scura nel campione altrimenti fluorescente. Infine, le molecole fluorescenti dell’ambiente circostante possono diffondere attraverso il campione e scambiare le molecole fotosubite con quelle intatte. Questo recupero di fluorescenza viene misurato nel tempo.

Siccome molti fattori possono influenzare la cinetica di recupero, gli esperimenti FRAP devono essere pianificati bene e i dati risultanti devono essere analizzati attentamente. È quindi possibile ottenere il coefficiente di diffusione e i parametri di mobilità della molecola utilizzando la modellazione matematica.

Si tratta di una serie di esperimenti di recupero.