Fluorimetro

Un disegno semplicistico dei componenti di un fluorometro

Tipicamente i fluorometri utilizzano un doppio raggio. Questi due fasci lavorano in tandem per diminuire il rumore creato dalle fluttuazioni della potenza radiante. Il fascio superiore viene fatto passare attraverso un filtro o un monocromatore e passa attraverso il campione. Il fascio inferiore passa attraverso un attenuatore e viene regolato per cercare di eguagliare la potenza fluorescente emessa dal campione. La luce della fluorescenza del campione e il fascio inferiore attenuato vengono rilevati da trasduttori separati e convertiti in un segnale elettrico che viene interpretato da un sistema informatico.

Nella macchina il trasduttore che rileva la fluorescenza creata dal fascio superiore si trova a una distanza dal campione e a un angolo di 90 gradi dal fascio superiore incidente. La macchina è costruita in questo modo per diminuire la luce parassita del fascio superiore che può colpire il rivelatore. L’angolo ottimale è di 90 gradi.Ci sono due approcci diversi per gestire la selezione della luce incidente che dà luogo a diversi tipi di fluorimetri. Se i filtri sono usati per selezionare le lunghezze d’onda della luce, la macchina è chiamata fluorimetro. Mentre uno spettrofluorimetro userà tipicamente due monocromatori, alcuni spettrofluorimetri possono usare un filtro e un monocromatore. Dove, in questo caso, il filtro a banda larga agisce per ridurre la luce parassita, anche da ordini di diffrazione indesiderati del reticolo di diffrazione nel monocromatore.

Le fonti di luce per i fluorometri sono spesso dipendenti dal tipo di campione da analizzare. Tra le fonti di luce più comuni per i fluorimetri c’è la lampada a mercurio a bassa pressione. Questa fornisce molte lunghezze d’onda di eccitazione, rendendola la più versatile. Tuttavia, questa lampada non è una fonte continua di radiazione. La lampada ad arco di xeno è usata quando è necessaria una fonte continua di radiazione. Entrambe queste fonti forniscono uno spettro adeguato di luce ultravioletta che induce la chemiluminescenza. Queste sono solo due delle molte possibili fonti di luce.

Le cuvette di vetro e di silice sono spesso i recipienti in cui viene posto il campione. Bisogna fare attenzione a non lasciare impronte digitali o qualsiasi altro tipo di segno sulla parte esterna della cuvetta, perché questo può produrre una fluorescenza indesiderata. Solventi “Spectro grade” come il metanolo sono a volte usati per pulire le superfici dei contenitori per minimizzare questi problemi.