Characterization of a DNA-protein complex and capsomere subunits derived from polyoma virus by treatment with ethyleneglycol-bis-N,N’-tetraacetico e ditiotreitolo

Il trattamento dei virioni di polyoma con etilenglicole-bil-N,N’-tetraacetico (EGTA) e ditiotreitolo (DTT) a pH 8.5 ha portato alla dissociazione dei virioni in un complesso DNA-proteina e singole subunità strutturali del capsomero. Il valore di sedimentazione del complesso DNA-proteina nei gradienti di saccarosio era di circa 48S, e aveva una densità di 1,45 g/cm3 nei gradienti di equilibrio CsCl. L’analisi del saccarosio alcalino del DNA all’interno di questo complesso DNA-proteine ha dimostrato che circa il 75% del DNA è il componente 1. Le proteine associate al DNA sono state dissociate dal trattamento con NaCl o con il detergente anionico Sarkosyl. VP1 e le proteine istone VP 4–7 erano le principali proteine associate al DNA. Il trattamento del complesso DNA-proteina con pH alcalino ha portato alla rimozione specifica di FP1. La microscopia elettronica del complesso DNA-proteina 48S ha dimostrato che è una struttura a spirale molto stretta che è leggermente più grande del virione intatto. Il trattamento del complesso con NaCl o con un tampone a pH 10.5 ha portato alla perdita di proteine e al successivo allentamento del complesso DNA-proteina in modo che il DNA potesse essere visualizzato. Le subunità capsomere rilasciato a seguito del trattamento EGTA-DTT sedimentato come 18S, 12S, e 5S subunità in gradienti di saccarosio. L’analisi elettroforetica dei capsomeri isolati ha dimostrato che VP1, VP2 e VP3 erano presenti in ogni specie, anche se i rapporti delle proteine variavano. Oltre alle proteine strutturali, gli istoni VP 4–7 sono risultati prevalentemente associati alla subunità 5S del capsomero.