Mi a különbség az FPLC és a HPLC között

A FPLC a gyors fehérje folyadékkromatográfia, a HPLC pedig a nagy teljesítményű folyadékkromatográfia rövidítése. Bár mindkét technika hasonló, kromatográfiás módszereikben jelentős különbségek vannak. A HPLC elsősorban folyékony minták mennyiségi és minőségi elemzésére használt analitikai technika. Ezzel szemben az FPLC egy tisztítási technika, amelyet fehérjekeverékek szétválasztására és az elválasztott, érdeklődésre számot tartó komponensek összegyűjtésére használnak. Míg a HPLC és az FPLC egyaránt használ szivattyúkat, detektorokat, szelepeket és szoftvereket, az FPLC pH- és vezetőképesség-monitorokat, valamint frakciógyűjtőket is alkalmaz. A HPLC-t az FPLC-től az is megkülönbözteti, hogy a HPLC-t analitikai technikának, míg az FPLC-t preparatív technikának tekintik.

A HPLC-ben többféle módszert alkalmaznak az elválasztásokhoz, amelyek közül a fordított fázisú kromatográfia a legelterjedtebb. A HPLC a mozgófázisként oldószereket, az FPLC pedig sópuffereket használ. Az FPLC számos tisztítási módszert alkalmaz, beleértve az ioncserét, a gélszűrést és az affinitást, valamint más, kevésbé használt módszereket. Az FPLC tisztítás általában többlépcsős folyamat, amely a módszerek kombinációját tartalmazza.

A HPLC szivattyúfejek rozsdamentes acélból készülnek, és az áramlási sebesség általában nem haladja meg a 10 ml/perc értéket, míg az ellennyomás-képesség általában 6000 psi és magasabb. Az FPLC szivattyúfejek titánból vagy PEEK anyagból készülnek, és a padra szerelhető szivattyúk akár 150 ml/perc áramlási sebességet is képesek biztosítani, de az ellennyomás ezeknél a nagy áramlási sebességeknél körülbelül 725 psi. Az FPLC-ben az áramlási sebességek általában magasabbak, mint a HPLC-ben, ahol az ellennyomás jellemzően alacsonyabb.

Az oszlopok is különböznek, valamint az oszlopok anyaga és részecskemérete is. A HPLC oszlopok rozsdamentes acélból készülnek. Az FPLC-oszlopok vagy üvegtestekből készülnek nagy teljesítményű gyanta tetejével és aljával, vagy PEEK-ből.

A legtöbb HPLC-gyanta szilikagömbökből készül, amelyek kis részecskeméretűek és nagyon nagy ellennyomást képesek elviselni. Az FPLC agarózt, polimer anyagokat vagy szilícium-dioxid anyagokat használ. Az FPLC esetében a részecskeméretek nagyobbak és nagy pórusmérettel rendelkeznek. Az FPLC gyanták a korábban említett anyagok és méretek miatt kevésbé képesek kezelni a nagyon magas ellennyomást.

A HPLC jellemzően rozsdamentes acélt használ az áramlási útvonalban. Az FPLC áramlási útvonalban a rozsdamentes acél kerülendő, és titán, PEEK és más nagy teljesítményű kompozitokkal helyettesíthető.

A HPLC-t kis molekulatömegű vegyületek elválasztására használják. Az FPLC-t nagy biomolekulák, például fehérjék, nukleotidok és peptidek tisztítására használják.

A szoftver is különbözik a két technika között. A HPLC kromatográfiás szoftver vezérli a műszereket és elemzi az adatokat. Az FPLC szoftver vezérli a modulokat, valamint integrálja a megtisztított minták gyűjtését a frakciógyűjtőbe. Az FPLC-rendszerek az UV-abszorpció ellenőrzése mellett a pH-t és a vezetőképességet is figyelik.

A HPLC és az FPLC teljesítménye egyaránt javult a bevezetésük óta. Az első HPLC-t 1969-ben a Waters Corporation vezette be kereskedelmi forgalomba. Az első FPLC rendszert a Pharmacia fejlesztette ki 1982-ben. Ma már több cég kínál HPLC megoldásokat, mint FPLC megoldásokat.