Kollagenáz A

Általános leírás

A kollagenáz egy proteáz, amely a kollagén nevű hármas héjú fehérjét hasítja. A Clostridium histolyticum hatféle kollagenázt termel, nevezetesen α, β, γ, δ, ε és λ. Ezek a kollagenázok a kötőszövet ellen aktívak, és nagyobb reakciókészséget mutatnak a zselatinnal, mint a kollagénnel szemben. A Clostridium histolyticumból nyert kollagenáz nagyon erős aktivitással rendelkezik, mivel a kollagént mindkét végéről emészti, akár 4-10 °C-os hőmérsékleten is.

Specificitás

A kollagenáz lebontja a natív kollagént. A klosztripain, a tripszinszerű enzimek és a semleges proteázok más fehérjéket is lebontanak.
Enzimaktivitás:
Kollagenáz aktivitás: >0,15U/mg (Wünsch szerint) (+25°C, 4-fenil-azobenzil-oxikarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg mint szubsztrát)
Kontamináló enzimaktivitás: tripszin, klosztripain és semleges proteolitikus aktivitás
A kollagenáz A enzimaktivitások aránya kiegyensúlyozott.

Alkalmazás

A C. histolyticumból származó kollagenázt széles körben használják számos szövettípus (pl. tüdő, szív, izom, csont, zsírszövet, máj, vese, porc, emlőmirigy, placenta, erek, agy, tumorok, köldökzsinór) szétbontására és egysejtű szuszpenziók előállítására primer sejtkultúra rendszerek létrehozásához. A kollagenáz A akkor ajánlott, ha a hozam, az életképesség és a funkcionalitás fontos.
A Roche által gyártott Clostridium kollagenáz számos szövettípusból származó sejtek, például hepatociták, adipociták, hasnyálmirigy-szigetsejtek, hámsejtek, izomsejtek, endothelsejtek stb. előkészítésére szolgál. Az enzim egyes tételeinek alkalmasságát egy adott szövet bontására azonban empirikusan kell meghatározni.

Egység meghatározása

Tartalom
Lyophilizátum, nem steril

Egység meghatározása: A Roche-tól származó kollagenázt Wünsch egységekben mérik (1 μmol termék képződik percenként +25 °C-on Wünsch szubsztráttal).
Gyakran a kollagenáz aktivitást Mandl egységekben adják meg (1 μmol leucin szabadul fel a kollagénből 5 óra alatt +37 °C-on).
A két aktivitási egység között sajnos nincs egységes átváltási tényező, mivel a Mandl-egység részben a kollagenázkészítményben lévő szennyező proteázok koncentrációjától függ, ami egy meghatározhatatlan változó. Egy tisztább kollagenáz-készítmény valójában alacsonyabb fajlagos aktivitást adna Mandl-egységben kifejezve, mint egy nyers készítmény. A Clostridium-készítmények általában körülbelül 1:1800-as átváltási faktorokat adnak (pl. egy adott tétel Clostridium kollagenáz körülbelül 0,15 Wünsch U/mg és 250 Mandl U/mg-ot tartalmazott).

Elkészítési megjegyzés

Aktivátor: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-merkaptoetanol
A kollagenázt nem gátolja a szérum.
Klostripain inhibitorok: TLCK
Tripszin inhibitorok: aprotinin, tripszin inhibitor (tojásfehérje, szója), szérum
Munkakoncentráció: 0,5-2,5 mg/ml
Tárolási körülmények (munkaoldat): -15 és -25 °C között
A Roche azt javasolja, hogy a liofilizátumból csak az azonnali felhasználáshoz szükséges mennyiséget állítsuk helyre. A rekonstituált oldat -15 és -25 °C között legfeljebb egy hétig tárolható. Kerülje az ismételt fagyasztást és felolvasztást, mivel a rekonstitúció után csökken az aktivitás.

Rekonstitúció

Rekonstitúció bármilyen kiegyensúlyozott sóoldatban (pl. HBSS)

Egyéb megjegyzések

Kizárólag élettudományi kutatásokhoz. Nem használható diagnosztikai eljárásokban.

A szállítási feltételek változhatnak