— FRAPcms

A FRAP egy fluoreszcens mikroszkópiai módszer a fluoreszcensen jelölt molekulák mobilitásának vizsgálatára élő sejtekben. Alkalmazzák a molekulák sejten belüli diffúziójának, a biomembránok fluiditásának és a fehérjekötődésnek az elemzésére.

Elv:

AFRAP egy modern konfokális mikroszkóp segítségével végezhető. Szükség van az érdeklődésre számot tartó molekula fluoreszcens jelölésére, például GFP-jelölésű antitesttel. Egy tipikus FRAP-kísérlet három különböző fázist foglal magában. Először a kezdeti fluoreszcenciát mérjük az érdeklődésre számot tartó régióban. Ezután a fluoreszcens molekulákat egy kiválasztott területen belül fotobleachálják. Ez úgy történik, hogy a lézersugarat az adott területre fókuszáljuk, ami a fluoroforok intenzív megvilágításához és kioltásához vezet. Ennek eredményeként egy sötét terület figyelhető meg az egyébként fluoreszkáló mintában. Végül a környezetből származó fluoreszcens molekulák átdiffundálhatnak a mintán, és a fotobleachált molekulákat ép molekulákra cserélhetik. Ezt a fluoreszcencia-visszanyerést az idő múlásával mérjük.

Mivel a visszanyerési kinetikát számos tényező befolyásolhatja, a FRAP-kísérleteket jól meg kell tervezni, és a kapott adatokat gondosan elemezni kell. Ezután matematikai modellezéssel meg lehet kapni a diffúziós együtthatót és a molekulák mobilitási paramétereit.