Characterization of a DNA-protein complex and capsomere subunits derived from polyoma virus by treatment with ethyleneglycol-bis-N,N’-tetraecetsavval és ditiotreitollal

Polyoma-vírusok kezelése etilénglikol-bil-N,N’-tetraecetsavval (EGTA) és ditiotreitollal (DTT) pH 8-on.5 pH-nál a virionok DNS-fehérje komplexre és egyedi szerkezeti kapszomer alegységekre történő szétválását eredményezte. A DNS-fehérje komplex ülepedési értéke szacharóz gradiensben megközelítőleg 48S volt, egyensúlyi CsCl gradiensben pedig 1,45 g/cm3 sűrűségű volt. Az ebben a DNS-fehérje komplexben lévő DNS lúgos szacharóz analízise azt mutatta, hogy a DNS körülbelül 75%-a az 1. komponens. A DNS-hez kapcsolódó fehérjéket NaCl vagy Sarkosyl anionos detergenssel történő kezeléssel disszociáltuk. A VP1 és a VP 4–7 hisztonfehérjék voltak a DNS-hez kapcsolódó fő fehérjék. A DNS-fehérje komplex lúgos pH-val történő kezelése az FP1 specifikus eltávolítását eredményezte. A 48S DNS-fehérje komplex elektronmikroszkópos vizsgálata kimutatta, hogy az egy nagyon szorosan tekeredett szerkezet, amely valamivel nagyobb, mint az ép virion. A komplex NaCl-lal vagy pH 10,5 pufferrel történő kezelése a fehérje elvesztését és ezt követően a DNS-fehérje komplex fellazulását eredményezte úgy, hogy a DNS láthatóvá vált. Az EGTA-DTT kezelés hatására felszabaduló kapszomer alegységek 18S, 12S és 5S alegységként üledeztek szacharóz gradiensben. Az izolált kapszomerek elektroforetikus elemzése kimutatta, hogy a VP1, VP2 és VP3 minden fajban jelen volt, bár a fehérjék aránya eltérő volt. A szerkezeti fehérjék mellett a VP 4–7 hisztonok túlnyomórészt az 5S kapszomer alegységhez kapcsolódtak.