A 2D DIGE alapjai
A kétdimenziós (2D) gélelektroforézis technikája hatékony eszköz a fehérjék összetett keverékeinek szétválasztására, de az 1970-es évek közepén történt bevezetése óta az a stigma ragadt rá, hogy nagyon nehezen elsajátítható alkalmazás, és általában a szakértők használták a leghatékonyabban. A kereskedelmi forgalomban kapható immobilizált pH-gradiensek bevezetése az 1990-es évek elején jobb reprodukálhatóságot és egyszerűbb protokollokat biztosított, ami a technika népszerűségének jelentős növekedéséhez vezetett. A gélek közötti eltéréseket azonban továbbra is nehéz volt ellenőrizni technikai ismétlések használata nélkül. Az 1990-es évek közepén (a “proteomika” születésével egy időben) Jon Minden csoportja megvalósította a fluoreszcensen jelölt fehérjék 2D gélszeparációhoz történő multiplexálásának koncepcióját, amely lehetővé tette, hogy a kísérleteket úgy tervezzék meg, hogy gyakorlatilag kiküszöböljék a géltől gélig terjedő eltéréseket, ami azt eredményezte, hogy a statisztikai elemzéshez biológiai ismétléseket használnak, és képesek a fehérjék relatív mennyiségében bekövetkező nagyon kis változások kimutatására. Ezt a technológiát 2D differenciagél-elektroforézisnek (2D DIGE) nevezik.
Leave a Reply