Quelles sont les différences entre FPLC et HPLC

FPLC signifie chromatographie liquide rapide des protéines et HPLC signifie chromatographie liquide à haute performance. Bien que les deux techniques soient similaires, il existe des différences significatives dans leurs méthodes chromatographiques. La HPLC est une technique d’analyse utilisée principalement pour l’analyse quantitative et qualitative d’échantillons liquides. En revanche, la FPLC est une technique de purification qui sert à séparer des mélanges de protéines et à recueillir les composants séparés qui présentent un intérêt. Alors que la HPLC et la FPLC utilisent toutes deux des pompes, des détecteurs, des vannes et des logiciels, la FPLC utilise également des moniteurs de pH et de conductivité ainsi que des collecteurs de fraction. Une autre façon de différencier l’HPLC de la FPLC est que l’HPLC est considérée comme une technique analytique alors que la FPLC est une technique préparative.

En HPLC, plusieurs méthodes sont utilisées pour les séparations, la chromatographie en phase inversée étant la plus répandue. L’HPLC utilise des solvants pour la phase mobile et la FPLC utilise des tampons de sel pour la phase mobile. La FPLC utilise plusieurs méthodes de purification, notamment l’échange d’ions, la filtration sur gel et l’affinité, ainsi que d’autres méthodes moins utilisées. La purification FPLC est généralement un processus en plusieurs étapes comprenant une combinaison de méthodes.

Les têtes de pompe HPLC sont fabriquées en acier inoxydable et la capacité de débit ne dépasse généralement pas 10 ml/min, alors que la capacité de contre-pression est généralement de 6000 psi et plus. Les têtes de pompe FPLC sont fabriquées en titane ou en PEEK et les pompes de table peuvent fournir des débits aussi élevés que 150 ml/min mais des contre-pressions d’environ 725 psi à ces débits élevés. Les débits en FPLC sont généralement plus élevés qu’en HPLC, où les contre-pressions sont généralement plus faibles.

Les colonnes diffèrent également ainsi que les matériaux de colonne et les tailles de particules. Les colonnes HPLC sont fabriquées en acier inoxydable. Les colonnes FPLC sont constituées soit de corps en verre avec des sommets et des fonds en résine haute performance, soit de PEEK.

La plupart des résines HPLC sont constituées de billes de silice avec des particules de petite taille qui peuvent supporter des contre-pressions très élevées. La FPLC utilise de l’agarose, des matériaux polymères ou des matériaux en silice. La taille des particules pour la FPLC est plus grande et les pores sont de grande taille. Les résines FPLC ne sont pas aussi capables de supporter des contre-pressions très élevées en raison du matériau et des tailles mentionnés précédemment.

La HPLC utilise généralement de l’acier inoxydable dans le chemin d’écoulement. Dans un chemin d’écoulement FPLC, l’acier inoxydable est évité et remplacé par du titane, du PEEK et d’autres composites haute performance.

La HPLC est utilisée pour séparer les composés de faible poids moléculaire. La FPLC est utilisée pour purifier les grandes biomolécules telles que les protéines, les nucléotides et les peptides.

Le logiciel diffère également entre les deux techniques. Le logiciel de chromatographie HPLC contrôle l’instrumentation et analyse les données. Le logiciel FPLC contrôle les modules ainsi que l’intégration de la collecte des échantillons purifiés dans le collecteur de fraction. En plus de surveiller l’absorption des UV, les systèmes FPLC surveillent également le pH et la conductivité.

Les performances de la HPLC et de la FPLC se sont améliorées depuis leurs introductions. En 1969, le premier HPLC a été introduit commercialement par Waters Corporation. Le premier système FPLC a été développé par Pharmacia en 1982. Aujourd’hui, plus d’entreprises proposent des solutions HPLC que des solutions FPLC.